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目的: 本实验目的是研究在肿瘤微环境中,低、未分化胃癌细胞来源微粒(MPs )对高分化胃癌细胞生物学行为(间叶特点、迁移能力、侵袭能力、增殖能力等)的影响。 方法: 1.免疫组化法检测三种胃癌细胞株(NCI-N87细胞,AGS细胞,HGC-27细胞)中 E-cadherin、Vimentin的表达水平及表达部位。 2.低温高速差速离心法提取AGS细胞来源微粒(AMPs)和HGC-27细胞来源微粒(HMPs)。流式细胞术(FCM)检测微粒大小并对其免疫表型进行鉴定,纳米示踪术(NTA)检测微粒粒子直径大小及其分布比例。 3.QRT-PCR、Western-Blotting 方法检测三种胃癌细胞(NCI-N87细胞,AGS细胞,HGC-27细胞)和AMPs、HMPs处理后NCI-N87细胞中E-cadherin、Vimentin的表达水平。 4. Transwell实验检测三种胃癌细胞(NCI-N87细胞,AGS细胞,HGC-27细胞)和AMPs、HMPs处理后NCI-N87细胞迁移、侵袭能力。 5.免疫荧光检测AMPs、HMPs处理后NCI-N87细胞骨架蛋白F-actin的表达。Western-Blotting 方法检测AMPs、HMPs处理后NCI-N87细胞MMP-9蛋白表达。 6. MTS 细胞增殖实验检测三种胃癌细胞(NCI-N87细胞,AGS细胞,HGC-27细胞)和AMPs、HMPs处理后NCI-N87细胞的增殖能力。 结果: 1.低分化的AGS细胞、未分化的HGC-27细胞相对于高分化的NCI-N87细胞E-cadherin表达水平明显降低、Vimentin表达水平明显升高(P<0.05)。 2.低分化的AGS细胞、未分化的HGC-27细胞相对于高分化的NCI-N87细胞迁移能力、侵袭能力、增殖能力明显增强(P<0.05)。 3.NTA、FCM检测微粒为粒子直径大小在0.1-1μM之间的囊泡状结构,用AnnexinⅤ和CD326抗体对微粒进行双标,AMPs、HMPs的双阳性比例分别为94.2%、93.5% 。结果表明提取的微粒即是AGS胃癌细胞、HGC-27胃癌细胞来源的微粒。 4.HMPs 可诱导高分化的NCI-N87 细胞在蛋白水平和 mRNA 水平上E-cadherin表达明显降低、Vimentin表达明显增高,使高分化的NCI-N87细胞迁移能力、增殖能力明显增强(P<0.05),侵袭能力改变无统计学差异(P>0.05)。AMPs对高分化的NCI-N87细胞在蛋白水平和mRNA水平上E-cadherin、Vimentin的表达无明显影响,对高分化NCI-N87细胞迁移能力、侵袭能力、增殖能力无明显影响(P>0.05)。 5.HMPs可诱导高分化的NCI-N87细胞骨架蛋白F-actin表达增高,而MMP-9蛋白的表达改变无统计学差异(P>0.05)。AMPs对高分化的NCI-N87细胞骨架蛋白F-actin表达和MMP-9蛋白表达均无明显影响(P>0.05)。 结论: 1.低、未分化的胃癌细胞相对于高分化胃癌细胞具备更明显的间叶特点,更强的迁移、侵袭和增殖能力。 2. 未分化胃癌细胞来源微粒可促进高分化胃癌细胞恶性表型(间叶特点、迁移和增殖能力)进展,而低分化胃癌细胞来源微粒不能促进高分化胃癌细胞恶性表型进展。