酸雨的污染是当代国际性的重大生态环境问题,以乌龙岭龙眼成年树为材料,研究pH 2.5、3.5、5.6(对照)的模拟酸雨胁迫下龙眼叶片基因的差异表达。对龙眼叶片RNA的提取方法作出探索,以此为模板对影响DDRT—PCR扩增的重要参数进行优化试验,并建立了适合龙眼叶片的差异显示分析体系,最佳体系为:25μl体系中RNA投入量为3.0μg,锚定引物浓度0.8μmol/L,随机引物浓度0.8μmol/L,dNTP浓度200μmol/L,Taq酶浓度1.25U,退火温度40℃。找出一个与酸雨胁迫有关的EST序列,登录到GenBank上,其登录号为FC860625,BLASTN核苷酸同源性比较结果显示此片段与已报道的杨树叶片受干旱胁迫的EST有75%的同源性。另外,利用BLASTX蛋白质同源性查询,其可能的编码产物与葡萄上的一个未命名的蛋白产物存在66%左右的相似性,与水稻上一个假定的转录起始因子存在59%的相似性,与拟南芥ATP结合因子/RNA聚合酶Ⅱ转录因子存在39%的相似性。推测此差异片段可能是龙眼对酸雨信号感知后产生的第二信使物质激活的转录因子,引起酸雨相应基因的表达;也可能与胁迫条件下进行无氧呼吸、能量的加快消耗有关。根据苹果、番茄、拟南芥、小麦上已克隆得到的DHAR同源基因的保守区序列,设计合成兼并引物,在龙眼叶片上克隆得到了长度为437bp龙眼中的DHAR保守区片段;利用RACE方法,根据本试验所得的DHAR cDNA保守区序列,设计3’端特异引物,克隆得到了此基因3’端的序列。推测调控抗坏血酸代谢是提高龙眼抗酸雨胁迫的一条可行途径。通过超量表达促进抗坏血酸再生的酶如DHAR的活性,可以提高龙眼体内抗坏血酸的含量,同时龙眼对酸雨的抗性可能也有一定程度的提高。