【摘 要】
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嗜酸乳杆菌是动物肠道中的重要益生菌,具有诸多益生性能,并且在食品、药品、动物养殖等领域中广泛应用,具有十分广阔的市场前景。本文旨在从健康动物肠道菌群中筛选出可耐受胃肠道环境,具有潜在益生性能的嗜酸乳杆菌。并选出一株嗜酸乳杆菌进行高密度培养和高活性菌剂制备技术研究,为嗜酸乳杆菌在食品及饲料工业中的应用提供理论基础和菌种资源。具体的研究结果如下:（1）动物源嗜酸乳杆菌的筛选及鉴定:从16份健康猪粪便样
【基金项目】
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江西省优势科技创新团队建设计划项目“大宗农产品益生菌发酵关键技术及其产业化应用”项目编号:20181BCB24002；
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嗜酸乳杆菌是动物肠道中的重要益生菌,具有诸多益生性能,并且在食品、药品、动物养殖等领域中广泛应用,具有十分广阔的市场前景。本文旨在从健康动物肠道菌群中筛选出可耐受胃肠道环境,具有潜在益生性能的嗜酸乳杆菌。并选出一株嗜酸乳杆菌进行高密度培养和高活性菌剂制备技术研究,为嗜酸乳杆菌在食品及饲料工业中的应用提供理论基础和菌种资源。具体的研究结果如下:（1）动物源嗜酸乳杆菌的筛选及鉴定:从16份健康猪粪便样本中分离的乳酸菌经过分子生物学鉴定、形态学鉴定以及生理生化鉴定筛选出12株嗜酸乳杆菌,并且以冻干管的形式保存在南昌大学食品科学与技术国家重点实验室乳酸菌资源库中。（2）嗜酸乳杆菌的益生性能研究:与其他嗜酸乳杆菌相比,嗜酸乳杆菌NCUA065001对酸和胆盐有良好的耐受性,其存活率可分别达到80.28%、90.87%,且该菌株在模拟胃肠液的环境中存活率没有发生显著地下降,能较好地耐受消化道环境的压力。12株嗜酸乳杆菌对Caco-2细胞的黏附能力有显著差异,其中菌株NCUA065001对Caco-2细胞的黏附能力最强,为5.56%,而菌株NCUA065004、NCUA0650013对Caco-2细胞的黏附力最差,均为0.09%。12株嗜酸乳杆菌的发酵上清液和发酵上清液调节p H值为7.0对7种常见致病菌的抑菌活性存在较为显著的差异,部分嗜酸乳杆菌的发酵上清液对部分致病菌有良好的抑制效果,但当调节p H为7时抑菌性能出现明显的下降,而有些菌株在上清液p H调为中性后仍有较好的抑制效果,可能是由于产生除乳酸外的细菌素等代谢产物对致病菌有抑菌作用。其中NCUA065001、NCUA0650011的发酵上清液和经过调节p H后都对7种常见致病菌表现出了较好的抑制效果。12株嗜酸乳杆菌均未表现出溶血活性,并且对较大部分的抗生素敏感。综合菌株的性能,选择NCUA065001作为目标菌株进行后续研究。（3）嗜酸乳杆菌NCUA065001的高密度培养技术研究:基于单因素实验、PB实验、最陡爬坡实验和CCD实验确定了嗜酸乳杆菌NCUA065001的优化培养基配方:麦芽糖4.94%,鱼蛋白胨3%,细菌学蛋白胨2.25%,酪蛋白胨1.3%,七水合硫酸镁0.29%,无水乙酸钠0.41%,半胱氨酸0.08%,柠檬酸三铵0.21%,磷酸氢二钾0.2%、半胱氨酸酸盐0.02%。在优化培养基的基础上对培养条件进行了优化,确定最佳培养条件为:培养温度37℃,接种量为5%,初始p H为6.5,比MRS基础培养基提高了4.835倍,优化效果比较显著。进一步优化嗜酸乳杆菌NCUA065001的高密度发酵工艺参数,并确定最佳的工艺条件为:通入氮气,利用自动反馈补料系统流加20%的氨水以维持发酵液的p H为6.0,此时的活菌数最高可达8.9×10~9 cfu/m L。（4）嗜酸乳杆菌NCUA065001菌剂制备研究:进一步确定最佳的冻干工艺参数为:离心条件8000 r/min、5 min,选择15%蔗糖为保护剂,预冻时间为2 h,菌体与冻干保护剂的比例为2:3,此时嗜酸乳杆菌NCUA065001的冻干存活率最高可达到76.79%,活菌数为5.2×1011 cfu/g。
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