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研究背景和目的：GVHD是造血干细胞移植最严重也最常见的并发症。天然形成的调节T细胞(nTreg)能预防GVHD,但是nTreg的数量有限及其非选择性抑制大大阻碍了nTreg在临床上的应用。为了解决这些难题,我们选择了另一种方式即生成抗原特异性iTreg,并在临床前期骨髓移植模型上测试他们预防GVHD的有效性和选择性,同时观察了其对GVL效应的影响。研究方法：首先我们选择HY为目标抗原,因为HY是Y染色体编码,自然形成、在组织中广泛表达的次要组织相容性抗原,并被证明HY抗原在GVHD和GVL上发挥着重要作用。我们利用抗原提呈细胞结合HY抗原将幼稚T细胞在体外转化成HY特异性iTreg并体外进行混合淋巴细胞反应测试其抑制功能。然后在小鼠骨髓移植模型上观察HY特异性iTreg对不同性别受鼠(雌性/雄性)GVHD的效应及其作用机制。为了增加这种方法的临床应用前景,我们延伸这个研究到同种异基因抗原特异性iTregS。在一定浓度的IL-2、TGFβ、retinoic acid(RA)的条件下,我们在体外用同种异基因小鼠脾脏CD11chi细胞(DCs)刺激小鼠CD4+CD25细胞从而诱导生成同种异体抗原特异性iTreg。首先在体外测试其对反应T细胞的抑制功能,然后我们在小鼠同种异基因骨髓移植模型上研究了这些iTregs对GVHD的预防功能和选择特异性。接着,我们在小鼠异体骨髓移植的同时注入了萤光素酶转导的淋巴瘤A20细胞从而观察同种异体抗原特异性iTreg对GVL的影响。最后我们研究了iTregs分离GVHD和GVL的作用机制。结果：1.在体外可以诱导CD4+CD25-幼稚T细胞生成抗原特异性iTregs。2.在体外实验中,在HY抗原刺激的情况下HY抗原特异性iTregs能大大抑制反应细胞的增殖。3.当Tregs:Teff比例相对较低时,HY抗原特异性iTregs预防雄性受鼠GVHD的发生,而在雌性受鼠中没有这种保护作用。4.HY抗原特异性iTregs在雄性受鼠体内活化扩增,并且抑制肝脏和脾脏中的效应T细胞。5.在BALB/c小鼠脾脏DCs刺激产生的异体抗原特异性iTregs (BALB/c-iTreg)抑制功能体外实验中,我们观察到当被BALB/c异体抗原刺激时, BALB/c-iTregs显著抑制效应T细胞增殖,但当被FVB(无关)异体抗原刺激时抑制效应大大减低。6.在B6→ALB/c骨髓移植小鼠模型中,BALB/c-iTreg能显著延迟受鼠GVHD的发生并提高该组小鼠长期存活率,相比较B10BR-iTreg对受鼠GVHD的预防作用大大减低。7.我们还观察到在B6→BALB/c骨髓移植GVHD/GVL模型中,BALB/c-iTreg组小鼠的长期存活率仍显著高于Teff组,并且小鼠成像显示iTreg没有增加肿瘤复发。结论：1.大量的HY抗原特异性iTregs能在体外被诱导生成,这些iTregs在体外能特异性抑制效应T细胞。我们观察到在小鼠骨髓移植模型中HY抗原特异性iTregs能减少效应T细胞在受鼠体内的的扩增、活化和浸润,从而以一种抗原依赖性的方式有效预防GVHD。2.我们成功地在体外将幼稚T细胞诱导转化成同种异体抗原特异性iTregs。这些iTregs在体外高效特异性抑制T细胞扩增,而在体内活化后能预防GVHD的同时保持供者T细胞的GVL效应。