研究背景Duchenne型肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是最常见的肌营养不良类型,属于X染色体隐性遗传病,由位于Xp21片段上的抗肌肉萎缩蛋白(dystrophin)基因突变而致骨骼肌肌膜上dystrophin缺失引起。目前,DMD的诊断主要依靠临床表现、血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌肉病理与免疫组化、基因检测等,但血清CK值容易受应激、感染、损伤等多种因素的影响,且诊断的特异性较差;肌肉病理与免疫组化属于有创性检查,而基因检测所需费用较高。因此,探寻诊断DMD的非侵入性、稳定的新型生物标志物具有重要意义。Micro RNAs(mi RNAs/mi Rs)是一类约含有19~25个核苷酸(nucleotide,nt)的非编码单链微小RNA,在人类基因组中,大约有30%的基因受mi RNAs的调节,具有高度的保守性、时序性和组织特异性。在众多的mi RNAs家族中,mi R-206、mi R-1、mi R-133a/b属于经典的肌肉特异性mi RNAs,它们组成进化过程中保守的肌肉转录调节网络,在肌肉的正常生长发育、能量代谢与肌肉的损伤、坏死等病理过程均发挥重要作用。近年来,外周血mi RNAs已被视为多种疾病潜在的生物标志物,如:癌症、肝损伤、心血管疾病等,但关于循环血中mi RNAs能否作为诊断DMD的研究相对较少。研究目的探讨全血肌肉特异性mi R-206、mi R-1、mi R-133a/b作为诊断DMD的新型、非侵入性生物标志物的可能性,为DMD的诊断提供依据。研究对象及方法收集2013年1月~2015年5月期间于郑州大学第五附属医院就诊的6-17岁DMD男童24人(平均年龄8.88±2.72岁)作为DMD组;选择家庭、经济条件等与实验组相似的6-17岁健康男童24人(平均年龄8.71±2.63岁)作为健康对照组。两组年龄、身高、体重等均无统计学意义(P>0.05)。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)技术检测DMD组与健康对照组儿童全血中肌肉特异性mi RNAs的表达,采用Pearson相关分析法分析DMD组患儿肌肉特异性mi RNAs与年龄、肌力与肌肉功能之间的相关性,绘制ROC曲线判断肌肉特异性mi RNAs作为DMD诊断标准的可靠性。结果1.肌肉特异性mi RNAs的表达情况肌肉特异性mi RNAs在DMD组患儿全血中的表达明显高于对照组,两组比较有显著差异(P<0.05)。2.肌肉特异性mi RNAs与年龄、肌力、肌肉功能之间的相关关系(r)DMD组中肌肉特异性mi RNAs在全血中的表达水平与年龄呈低度负相关(P<0.05),与肌力、肌肉功能呈中度正相关(P<0.05)。3.ROC曲线结果DMD组中全血肌肉特异性mi RNAs的ROC曲线下面积(AUC)≥0.87,灵敏度及特异度均良好,尤以mi RNA-206为著。结论肌肉特异性mi RNAs在DMD患者全血中的表达水平与临床病情进展密切相关,可作为诊断DMD的新型潜在、非侵入性生物学标志物,在临床工作中可不必分离血清而直接测定全血中肌肉特异性mi RNAs的表达来筛查DMD,为诊断DMD提供了新的理论依据。