【摘 要】
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目的:从细胞凋亡与自噬的角度,通过细胞学实验验证当归挥发油对缺血再灌注引起的神经细胞损伤的保护作用,并对相关分子生物学机制进行初步探讨。方法:本实验以高分化的PC12细胞为实验对象,采用“缺糖-复糖”结合“缺氧-复氧”的方法,在体外模拟神经细胞“缺血再灌注”损伤,MTT法检测当归挥发油对损伤后神经细胞存活率的影响,测定脂质过氧化物水平,评价其对神经细胞的保护作用。流式细胞术检测当归挥发油对损伤后P
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目的:从细胞凋亡与自噬的角度,通过细胞学实验验证当归挥发油对缺血再灌注引起的神经细胞损伤的保护作用,并对相关分子生物学机制进行初步探讨。方法:本实验以高分化的PC12细胞为实验对象,采用“缺糖-复糖”结合“缺氧-复氧”的方法,在体外模拟神经细胞“缺血再灌注”损伤,MTT法检测当归挥发油对损伤后神经细胞存活率的影响,测定脂质过氧化物水平,评价其对神经细胞的保护作用。流式细胞术检测当归挥发油对损伤后PC12细胞凋亡率的影响,细胞经AO/PI双染及AO染色后于荧光显微镜下观察细胞形态的变化,Western-blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达,以及ERK1/2信号转导通路和PI3K/Akt/mTOR信号转导通路蛋白的表达。结果:1、PC12细胞经模拟缺血再灌注损伤后,细胞存活率明显降低,LDH活性、MDA含量明显升高,SOD水平明显下降,当归挥发油能够明显提高损伤后细胞存活率,降低LDH,MDA水平,提高SOD活力。2、流式细胞术检测当归挥发油能够明显降低损伤细胞凋亡率,AO/PI染色后在荧光显微镜下可见当归挥发油能够明显改善细胞凋亡情况,同时AO染色结果显示与模型组相比,细胞自噬情况也得到一定程度改善。3、Western-blotting检测结果显示当归挥发油能够上调抗凋亡蛋白Bcl-2的水平,降低促凋亡蛋白Bax的水平,抑制Cleaved-Caspase-3的表达。同时能够降低自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5、LC3B-Ⅱ的表达。4、Western-blotting检测结果显示当归挥发油能够提高损伤细胞中ERK1/2信号转导通路和PI3K/Akt/mTOR信号转导通路相关蛋白的表达。结论:1、当归挥发油可以改善细胞膜的通透性,提高细胞抗缺氧能力,降低细胞脂质过氧化反应,保护细胞免受自由基的攻击,减轻神经细胞缺血再灌注损伤。2、当归挥发油能够抑制缺血再灌注损伤PC12细胞凋亡和自噬水平。3、当归挥发油能够激活ERK1/2信号转导通路和PI3K/Akt/mTOR信号转导通路,这可能是其抑制受损细胞凋亡和自噬,保护神经细胞的主要机制。
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