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目的:观察散寒活血祛白方及其拆方对体外培养的正常人表皮黑素细胞系PIG1细胞的活力,酪氨酸酶活性及黑素生成的影响,探讨散寒活血祛白方及其拆方治疗白癜风的部分作用靶点。
方法:体外培养正常人表皮黑素细胞系PIG1细胞,应用不同浓度的散寒活血祛白方及拆方与PIG1细胞共同孵育24h,光学显微镜观察细胞形态学变化,以不加药物的细胞为对照组,以不加细胞的254培养基为空白组;CCK-8比色法测定散寒活血祛白方及拆方对细胞活力的影响,筛选散寒活血祛白方及其拆方的安全浓度。氢氧化钠裂解法测定各组中药干预黑素细胞后黑素的含量。体外多巴氧化反应法测定各组中药干预黑素细胞后酪氨酸酶的活性。电镜和光镜观察各组中药干预黑素细胞后细胞形态学变化。
结果:(1)与对照组相比,全方组可明显改善PIG1细胞的细胞活性,两组间差异具有显著性(P<0.05)。散寒温阳组对PIG1细胞的细胞活性具有明显的抑制性(P<0.05)。养血活血组和补益肝肾组对PIG1细胞的细胞活性无明显改善作用(P>0.05)。全方组不同浓度组间对比,浓度为8mg/mL时对细胞活性的增进效果明显优于其余两组(P<0.05),组间差异有显著性。(2)与对照组相比,全方组、养血活血组、散寒温阳组和补益肝肾组均可明显提高PIG1细胞的酪氨酸酶活性,两组间差异具有显著性(P<0.05)。全方组不同浓度组间对比,浓度为4mg/mL时对细胞酪氨酸酶活性的增进效果明显优于其余两组(P<0.05),组间差异有显著性。(3)与对照组相比,全方组可明显促进PIG1细胞的黑素合成,两组间差异具有显著性(P<0.05)。散寒温阳组、养血活血组和补益肝肾组对PIG1细胞的黑素合成无明显改善作用(P>0.05)。全方组不同浓度组间对比,浓度为8mg/mL时对细胞黑素合成效果明显优于其余两组(P<0.05),组间差异有显著性。
结论:(1)散寒活血祛白方可促进PIG1细胞的活性,散寒温阳组可抑制黑素细胞活性。(2)散寒活血祛白方及其拆方对酪氨酸酶有明显的激活作用。(3)散寒活血祛白方能促进PIG1细胞黑素的合成。(4)散寒活血祛白方能促进黑素细胞增殖,提高酪氨酸酶活性,进而促进黑素的合成。