银叶树叶总黄酮的内部沸腾法提取及抗氧化性研究

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天然产物有效成分中的黄酮类化合物一直是天然药化领域研究的热点。本文以主要有效成分为黄酮类化合物的银叶树叶为原料,采用内部沸腾法对比其他不同的提取方法对其总黄酮进行了提取并对提取液进行纯化,然后对纯化后的银叶树叶总黄酮进行了抗氧化活性研究,为银叶树叶的进一步开发应用提供理论基础。在提取工艺中,主要采用酶提法和内部沸腾法提取银叶树叶总黄酮,对工艺条件进行优化,并比较了内部沸腾法与醇提法及酶提法的提取效果,得出如下结论:(1)在单因素试验的基础上,采用正交设计试验对纤维素酶提取工艺进行优化,得到最优工艺条件:纤维素酶浓度0.8mg.mL-1,酶解温度45℃,pH5.0,酶解时间90min。总黄酮提取率为10.7%,总黄酮含量为43.8%。(2)采用单因素试验的方法,内部沸腾法得出最优工艺条件:解吸剂浓度为80%的乙醇,解吸剂的量为3mL·g-1,解吸时间为20min,提取剂浓度30%乙醇,提取剂用量为25mL·g-1,提取温度为85℃,提取2次,每次5min。通过平行实验验证表明该工艺条件数据稳定,具有可行性。在该条件下总黄酮提取得率为13.5%,提取物的黄酮含量达到46.9%。(3)三种工艺比较结果:内部沸腾法的总黄酮提取率分别比醇提法及酶提法提高了4.8%和2.8%;浸膏中含量分别比醇提法及酶提法提高了14.5%和3.1%。在分离纯化工艺中,主要采用萃取分离法和大孔吸附树脂分离法对内部沸腾法提取的黄酮类化合物进行纯化,以产物中的总黄酮含量及收率为指标,确定最优纯化工艺。研究表明:(1)选用正丁醇作为萃取剂,在无机盐的协助下与提取液进行等体积萃取,得到总黄酮的含量和收率分别为64.4%和87.9%;(2)AB-8树脂在最佳的纯化工艺:常温下,大孔树脂2.0g,上样质量浓度0.5mg.mL-1,样品液用量为26mL,洗脱剂浓度为40%乙醇溶液,吸附流速为1mL.min-1,洗脱流速为1mL.min-1洗脱剂用量为30mL,得到树脂的吸附量为6.45mg·g-1,解吸率为99.0%。在该工艺下分离纯化银叶树叶总黄酮,得到黄酮含量为80.9%,回收率为92.8%。(3)对两种纯化方法的结果进行比较,AB-8大孔树脂吸附纯化银叶树叶总黄酮的效果更好。选用猪油和食用油对纯化后的银叶树叶总黄酮产物进行抗氧化活性研究,采用碘量法测定银叶树叶总黄酮对油脂过氧化值(POV)的影响。试验结果表明:银叶树叶总黄酮对猪油和食用油均起到抗氧化作用,而且总黄酮含量越高,POV值越低,抗氧化效果越好。
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