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目的:以T细胞亚群的分化状态为切入点,观察寒凝血瘀证原发性痛经大鼠T细胞亚群及其细胞因子的失衡状态以及温经化瘀止痛法对其的调控作用,探讨温经化瘀止痛法治疗寒凝血瘀证原发性痛经的作用机制,为中医药防治本病提供客观有效的理论和实验室依据。同时系统整理分析现代中医临床研究文献中原发性痛经的用药规律,为温经化瘀止痛法防治本病提供文献学依据。方法:本研究分为实验研究和文献研究两部分。实验研究部分,将50只雌性W istar大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药小剂量组和中药大剂量组,除空白组外,通过寒冷刺激法联合苯甲酸雌二醇以及缩宫素建立寒凝血瘀证原发性痛经大鼠模型,对造模各组给予不同的干预方法。观察注射缩宫素后大鼠的扭体反应,记录其潜伏时间和反应次数。采用流式细胞术胞内外因子双染色法检测大鼠脾脏T细胞不同亚群[Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)、Treg(CD4+CD25+CD 127-)]的分化状态、酶联免疫法检测大鼠子宫组织中T细胞亚群特征性细胞因子(Th 1:IFN-γ,Th2:IL-4,Th17:IL-17A,Treg:TGF-β)的含量、逆转录聚合酶链式反应检测大鼠子宫组织T细胞亚群特征性细胞因子(Th1:TNF-α,Th2:IL-4,Th17:1L-17A,Treg:TGF-β)的mRNA转录水平。文献研究部分,检索中医药治疗原发性痛经的临床研究相关现代文献,建立方药数据库,通过采用频数分析、关联规则分析、聚类分析等数据挖掘方法进行分析,探讨原发性痛经临床研究相关方剂的用药规律。结果:实验研究结果表明,注射缩宫素后造模各组大鼠均出现扭体反应,各用药组扭体潜伏时间均有延长,但与模型组比较差异无统计学意义;30分钟内扭体反应次数均减少,中药两组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠脾脏Th1亚群细胞比例降低,Th2亚群细胞比例升高(P<0.01);子宫上清液中IFN-γ含量下降,IL-4含量升高,两者比值降低(P<0.01);子宫组织中TNF-αmRNA转录水平降低,IL-4mRNA转录水平升高(P<0.01);提示模型组大鼠Th1/Th2平衡向Th2亚群漂移。同时模型组大鼠脾脏Th17亚群细胞比例升高,Treg亚群细胞比例降低(P<0.01);子宫上清液中IL-17A含量升高,TGF-β含量降低,两者比值升高(P<0.01);子宫组织中IL-17AmRNA转录水平升高,TGF-βmRNA转录水平降低(P<0.01);提示模型组大鼠Th17/Treg平衡向Th17亚群漂移。与模型组比较,各用药组大鼠脾脏Th1亚群细胞比例升高(P<0.01),Th2亚群细胞比例降低(P<0.05);子宫上清液中IFN-γ含量升高,IL-4含量降低,两者比值升高(P<0.01);子宫组织中TNF-αmR NA转录水平升高,IL-4mRNA转录水平降低(P<0.01)。各组间比较,中药大剂量组调节Th1、Th2亚群细胞比例和IFN-γ含量的作用优于中药小剂量组;中药小剂量组调节IL-4含量的作用优于中药大剂量组。同时各用药组大鼠脾脏Treg亚群细胞比例升高,Th17亚群细胞比例降低(P<0.01);子宫上清液中IL-17A含量降低,TGF-β含量升高,两者比值降低(P<0.01);子宫组织中TGF-βmRNA转录水平升高,IL-17 AmRNA转录水平降低(P<0.01)。各组间比较,中药小剂量组调节Th17、Treg亚群细胞比例和IL-17A含量的作用优于中药大剂量组;中药大剂量组调节TGF-β含量的作用优于中药小剂量组。现代中医文献研究共检索出1970年～2016年原发性痛经相关文献4095篇,根据纳入标准和排除标准筛选出221首方剂。所纳入方剂中,共有126味药物,分属16个药物类别,其中补虚药和活血化瘀药两大类别比例最高,分别占药物类别总数的21.43%和17.46%;各类别药物的频数统计中,活血化疲药的使用频率最高,为31.46%;其次为补虚药,使用频率为28.81%;药物的性味归经统计中,温性药使用的次数最多,其次是寒性药和平性药,使用较多的药物味道为辛味、甘味、苦味,归属肝、脾、肾经的药物数量占前三位;高频药物有18味,针对高频药物进行关联规则分析,结果表明在原发性痛经的治疗中,当归是使用最多的药味,使用频率较高的配伍为当归和川芎、当归和延胡索、当归和香附、当归和白芍、当归和甘草,均在50%以上,常见的配伍以活血化瘀药与理气药的配伍为主;对本研究中18味高频药物的使用情况建立数据库,采用离差平方和法进行聚类分析得到三个聚类组合,组方配伍以活血、理气、温经为主,辅以补虚。结论:寒凝血瘀证原发性痛经大鼠存在T细胞亚群分化的失衡,其中Th1/Th2平衡向Th2亚群漂移,Th17/Treg平衡向Th17亚群漂移,因此T细胞亚群分化的失衡有可能是导致痛经发生的原因之一。温经化瘀止痛法可以调节T细胞亚群相关细胞因子的分泌,同时上调Th1、Treg亚群特征性细胞因子mRNA的转录水平,下调Th2、Th17亚群特征性细胞因子mRNA的转录水平,维持Th1/Th2和Th17/Treg亚群的平衡状态,初步阐明了温经化瘀止痛法通过调节T细胞亚群分化有效改善痛经症状的机制。原发性痛经的中医药治疗用药以补肾益气养血,活血调经止痛为主,与其“不荣则痛”与“不通则痛”的病机相符。原发性痛经的发生多与“瘀”有关,临床常见证型中以实证居多,用药多以温性药为主。