纤维素酶是一类能够将纤维素降解为葡萄糖的多组分酶系的总称，通过协同作用，将纤维素降解为寡糖和纤维二糖，最终水解为葡萄糖。纤维素酶在畜禽饲料和环境处理上发挥着重要的作用。在饲料中加入适量的纤维素酶可将纤维素最终分解为单糖葡萄糖，有利于被畜禽吸收和转化。纤维素酶还可将农作物秸秆和粪污中的纤维素分解成葡萄糖，在缓解环境压力的同时又可以产生大量的有机肥料。　　 本研究拟选取黑曲霉素(An)葡糖苷酶基因BglI、扣囊复膜孢酵母(Sf)葡糖苷酶基因BglI、绿色木霉(Tv)内切葡聚糖酶基因EgVII和带有信号肽的绿色木霉(Tv)内切葡聚糖酶基因EgVII-S作为目的基因转入枯草芽孢杆菌，以期获得具有高效纤维素酶基因的枯草芽孢杆菌工程菌。　　 主要研究如下:　　 1.以An-BglI-20T、Sf-BglI-18T、Tv-EgVII-18T、Tv-EgVII-S-18T和大肠-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pMA5载体为基础，构建了重组质粒Sf-BglI-pMA5、An-BglI-pMA5、Tv-EgVII-pMA5、Tv-EgVII-S-pMA5。　　 2.将An-BglI-pMA5、Tv-EgVII-pMA5、Tv-EgVII-S-pMA5三个质粒通过电转化转入枯草芽孢杆菌(Bs)168，得到的三株工程菌分别为:Bs168-An-BglI-pMA5、Bs168-Tv-EgVII-pMA5、Bs168-Tv-EgVII-S-pMA5。　　 3.通过刚果红染色和SDS-PAGE分析，结果显示:Bs168-An-BglI-pMA5和Bs168-Tv-EgVII-pMA5在枯草芽孢杆菌中均得到了很好的表达;蛋白大小分别为90.3kDa和26.8kDa，结合网站预测与相关文献报道是正确;但Bs168-Tv-EgVII-S-pMA5，没有得到表达或者表达量很低。　　 4.采用whatman No.1滤纸对纤维素酶工程菌进行滤纸酶活力(FPA)的测定，结果显示Bs168-Tv-EgVII-pMA5的胞外上清液中的酶活力为0.273U/mL，Bs168-An-BglI-pMA5的胞外上清液中酶的活力为0.049U/mL。对Bs168-Tv-EgVII-pMA5进行CMC-Na的酶活测定得出的酶活力是0.131U/mL。而Bs168在滤纸试验中，酶活测定是0.002U/mL，用CMC-Na和pNPG几乎检测不到任何酶活力。　　 5.工程菌培养条件优化结果表明，Bs168-Tv-EgVII-pMA5分泌纤维素酶作用的适宜pH范围为5-7，最适pH为5.6，适宜温度范围为35-70℃，最适温度为60℃，在适宜的温度和适宜pH范围内，此内切酶酶活保持最高酶活的65％以上。Bs168-An-BglI-pMA5分泌纤维素酶作用的适宜pH范围为5-7，最适为pH为5，适宜温度范围为50-80℃，最适温度为70℃，在适宜的温度和适宜pH范围内，此葡萄糖苷酶酶活可以保持在最高酶活的70％以上。　　 因此，对构建的葡聚糖酶基因工程菌Bs168-An-BglI-pMA5和Bs168-Tv-EgVII-pMA5的酶学特性研究表明，二者均能够表达出具有较高酶活的纤维素酶活力，为构建多功能的枯草芽孢杆菌工程菌提供了一定的理论依据。