丹参酮ⅡA及抗IGFBP7(rP1)抗体护肝机制的体外实验研究

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目的:探索丹参酮ⅡA对体外培养肝细胞株HL-7702的安全使用剂量并观察丹参酮ⅡA对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα和过氧化氢(H2O2)所致体外培养肝细胞损伤的保护作用;同时探讨丹参酮ⅡA对活化肝星状细胞增殖的抑制作用。 方法 1.选择体外培养人肝细胞株(HL-7702)作为研究对象,分别设立丹参酮ⅡA(1mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)处理组和正常对照组(加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)),通过MTT比色法检测肝细胞存活率。 2.选择体外培养人肝细胞株(HL-7702)作为研究对象,分别设立丹参酮ⅡA(1mg/L、2mg/L、4mg/L)处理组和正常对照组(加入等量PBS),检测细胞培养上清液中ALT和LDH含量的变化。 3.选择体外培养人肝细胞株(HL-7702)作为研究对象,分别设立TNFα(20ug/L)处理组、丹参酮ⅡA(2mg/L)对照组、丹参酮ⅡA(2mg/L)+TNFα(20ug/L)处理组和正常对照组(加入等量PBS),通过MTT比色法检测肝细胞存活率,同时测定细胞培养上清液中的ALT和LDH含量。 4.选择体外培养人肝细胞株(HL-7702)作为研究对象,分别设立H2O2(7.5mmol/L、15mmol/L、30mmol/L、50mmol/L、100mmol/L)处理组、丹参酮ⅡA(2mg/L)对照组、H2O2(7.5mmol/L、15mmol/L、30mmol/L、50mmol/L、100mmol/L)+丹参酮ⅡA(2mg/L)处理组和正常对照组(加入等量PBS),通过MTT比色法检测肝细胞存活率。 5.选择体外培养大鼠活化肝星状细胞株(HSC-T6)作为研究对象,分别设立丹参酮ⅡA(12.5mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L)处理组和正常对照组(加入等量PBS),通过MTT比色法检测肝星状细胞存活率。 结论: 1.丹参酮IIA对体外培养肝细胞株(HL-7702)的安全使用剂量范围为1-2mg/L。 2。丹参酮IIA在安全剂量范围内能减轻TNFα(20ug/L)和H2O2(7.5-15mmol/L)所致体外培养肝细胞的损伤。 3.丹参酮IIA在25-100mg/L的剂量范围内可以有效抑制活化肝星状细胞的增殖。 目的:探讨抗胰岛素样生长因子结合蛋白7(相关蛋白1)(IGFBP7/IGFBPrP1)抗体对活化的肝星状细胞增殖的抑制及凋亡的影响。 方法:选择体外培养的大鼠活化肝星状细胞株(HSC-T6)作为研究对象,分别设立抗IGFBP7(rP1)抗体处理组(0.25mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L)和正常对照组(加入等量PBS),干预因素处理14h,采用MTT比色法检测抗IGFBP7(rP1)抗体对活化肝星状细胞增殖抑制的影响;同时在相同处理因素作用下流式细胞仪Annexin-V/PI双染色法检测活化肝星状细胞凋亡发生率。 结论:抗IGFBP7(rP1)抗体能抑制活化肝星状细胞的增殖并促进其凋亡,推测抗IGFBP7(rP1)抗体可能会作为一种新的抗肝纤维化治疗药物。
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