目的糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)的主要微血管病变之一,也是导致终末期肾病(End stage renal disease,ESRD)的最主要原因之一。DN的发病机制不清,有研究发现持续低度的炎症反应的存在,在糖尿病肾病的发生与发展中起非常重要的作用。近年研究发现两面神经激酶(Janus Kinase,JAK)/信号传导及转录激活因子(Signal transducers and activators of transcription,STAT)信号通路参与了糖尿病肾病的发生和发展。近年研究报道表明雷公藤多苷及小檗碱均具有降低糖尿病肾病患者尿蛋白水平的作用,但具体作用机制尚不明确。本研究应用2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的大鼠模型为研究对象,以雷公藤多苷(tripterygium wilfordii glycosides,TWP)以及小檗碱(berberine,BBR)作为干预的药物,探讨不同剂量雷公藤多苷及小檗碱在T2DM大鼠肾脏JAK/STAT的信号通路的影响作用及其可能机制。方法清洁级雄性SD大鼠一共130只,随机选取其中10只SD大鼠饲以常规饲料,作为正常对照组;其余120只大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合小剂量STZ(30mg/kg)尾静脉注射诱导T2DM模型。将造模成功的SD大鼠随机分为糖尿病对照组(DM)、低、中、高剂量TWP组(TL,1mg/kg·d、TM,3mg/kg·d、TH,6mg/kg·d)、BBR及低、中、高剂量TWP联合BBR组(BBR,150mg/kg·d、TBL,1mg/kg·d+150mg/kg·d、TBM,3mg/kg·d+150mg/kg·d、TBH,6mg/kg·d+150mg/kg),SD大鼠造模成功后即开始灌胃。观察大鼠药物灌胃前后不同时间点代谢指标的变化。采用ELISA方法检测SD大鼠血清中ICAM-1和IL-6水平的变化,采用q PCR方法检测JAK2、STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6的m RNA表达量,Western blotting方法分别观察p-JAK2、p-STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6在肾组织中的表达情况,应用免疫组织化学方法行ICAM-1和IL-6的蛋白表达定位及半定量分析。结果(1)SD大鼠经过高脂高糖饲料喂养8周后,与NC组相比,高糖高脂喂养的SD大鼠血清TG、TC、FINS、HOMA-IR和HOMA-β指数显著升高(P<0.05),但血糖无明显变化(P>0.05)。STZ注射后大鼠的血糖较NC组显著升高(P<0.05),且应用TWP及BBR治疗后未发生明显变化(P<0.05)。各组大鼠的肝肾功能及血常规在灌胃8周末时,无明显差异(P>0.05)。(2)24h尿UMA水平:与NC组相比,DM组大鼠UMA明显升高(P<0.05),TWP、BBR、TWP联合BBR组大鼠UMA较DM组呈剂量依赖性降低,且以TM组、TH组、TBM组、TBH组降低最明显(P<0.05)。(3)ELISA方法检测大鼠血清中ICAM-1和IL-6水平的变化:DM组大鼠血清中ICAM-1和IL-6的表达较NC组显著增高(P<0.05),TWP、BBR、TWP联合BBR组大鼠血清中ICAM-1和IL-6的表达较DM组SD大鼠呈剂量依赖性降低,且以TM组、TH组、TBM组、TBH组降低最明显(P<0.05)。(4)q PCR法检测SD大鼠肾组织JAK2、STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6的m RNA表达量:DM组大鼠肾脏SOCS1、ICAM-1和IL-6 m RNA表达较NC组明显升高(P<0.05),TWP、BBR、TWP联合BBR组SD大鼠肾组织ICAM-1和IL-6 m RNA表达较DM组呈剂量依赖性降低,但SOCS1表达量在药物干预后呈剂量依赖性上升(P<0.05),JAK2及STAT3的表达量在各组之间无显著统计学差异(P>0.05)。(5)Western Blotting法检测大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3、IL-6、ICAM-1和SOCS1的蛋白表达:DM组大鼠肾组织p-JAK2、p-STAT3 IL-6、ICAM-1和SOCS1的蛋白表达量较NC组明显升高(P<0.05),TWP组、BBR组、TWP联合BBR组大鼠肾脏p-JAK2、p-STAT3、IL-6和ICAM-1蛋白表达较DM组呈剂量依赖性降低,SOCS1在各药物干预后,随着药物剂量的提高而增高(P<0.05)。(6)免疫组化法染色观察大鼠肾脏ICAM-1和IL-6蛋白表达定位及半定量分析:DM组大鼠肾脏肾小球和肾小球细胞间质中可见大量ICAM-1和IL-6的表达,即大量棕黄色颗粒物的沉积,在肾小管也可以见到其表达,黄染颗粒较NC组明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05),单用TWP组、BBR组、TWP联合BBR组大鼠肾脏ICAM-1和IL-6蛋白表达较DM组有不同程度减少,即棕黄色颗粒物及DM组明显减少,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论1.2型糖尿病大鼠肾组织中JAK/STAT信号通路的激活可以使下游炎症因子ICAM-1和IL-6的表达增多,进而导致糖尿病大鼠肾脏的损伤。2.雷公藤多苷联合小檗碱可以延缓2型糖尿病大鼠蛋白尿的进程,且呈剂量依赖性。3.雷公藤多苷联合小檗碱能够抑制2型糖尿病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路的激活,增高SOCS1的过表达,进而减少ICAM-1和IL-6炎症因子的表达。