论文部分内容阅读
动物疾病是制约畜牧业发展的一个因素,不仅给动物生产带来重大的经济的损失,同时也对人类的健康构成一定的威胁,通过抗病育种来提高动物机体免疫力和抗病性能是预防动物疾病的重要技术之一。本实验以抗病性能差异较大的猪品种或猪群、不同发病程度的猪为研究对象,对五个功能基因(FUT1、HLA-B2、MX1、CXCL12、EHMT2)进行SNP位点的筛选、基因多态性检测及其与猪瘟等抗体及血常规指标的关联分析,并探讨不同基因型在不同猪品种或猪群中的发病相对危险度,主要研究结果如下:1、筛选出了6个SNP位点,分别建立了6个多态位点检测技术,其中4个SNP位点(HLA-B2、Mx1、CXCL12、EHMT2)是采用引入酶切位点策略建立的检测技术。HLA-B2基因中检测到1个突变位点,第25内含子79 bpA/G突变在实验猪群中存在多态性,通过引入酶切位点的方法,建立了该位点PCR-BclI-RFLP基因分型方法。Mx1基因中检测到1个突变位点,第13外显子140 bp处存在C/T突变在实验猪中具有多态性,通过引入酶切位点的方法,建立了该位点PCR-FnuDⅡ-RFLP基因分型方法。EHMT2基因中检测到1个突变位点,第27内含子第262 bp处存在G/T突变在实验猪群中存在多态性,通过引入酶切位点的方法,建立了该位点PCR-PvuⅡ-RFLP基因分型方法。CXCL12基因中检测到3个突变位点,第3内含子7462 bp C/G突变在实验猪群中存在多态性,通过引入酶切位点的方法,建立了该位点PCR-BsmAI-RFLP基因分型方法;第3内含子7331 bp A/G突变产生了BSTN1酶切多态,建立了该位点PCR-BSTN1-RFLP基因分型方法;第3内含子7373-7374 bp AC/CT突变产生了Bsr1酶切多态,建立了该位点PCR-Bsr1-RFLP基因分型方法;2、在10个猪品种或猪群中检测该7个基因位点的多态性。FUT1基因在国外猪品种中具有多态性,在国内猪品种及亚洲野猪中均为单一GG基因型。HLA-B2基因BclI-RFLP基因位点在杜洛克、大白、清平和监利猪种均未检测到AA基因型,在小梅山中只检测GG基因型,其它猪种存在3种基因型。Mx1基因FnuDⅡ-RFLP基因位点在杜洛克、大白、金华、小梅山、清平、监利和野猪猪种均未检测到TT基因型,其它猪种存在3种基因型。在10个猪品种检测了EHMT2基因PvuⅡ-RFLP基因位点在杜洛克和监利猪种均未检测到TT基因型,在清平猪中只检测GG基因型,其它猪种存在3种基因型。CXCL12基因3个突变位点在9个猪种中进行了检测,BsmAI-RFLP位点在杜洛克猪种没有检测到CC基因型,其它猪种存在3种基因型;BSTN1-RFLP位点在清平和监利猪种只检测到GG一种基因型,在野猪中没有检测到AA基因型,其它猪种存在3种基因型;Bsr1-RFLP位点在所有猪种中均存在3种基因型。3、大肠杆菌受体的候选基因FUT1的307位点在国内品种猪中只有GG基因型;国外品种具有多态性,并且其多态与发病相对危险度存在显著相关(P＜0.05),GG基因型的发病相对危险度可能是AA基因型的2.040倍(P=0.025)。4、猪HLA-B2基因第25内含子多态性与健康猪、康复猪、正发病猪和死亡猪四个杜长大猪群中的发病相对危险度相关,AA基因型的发病相对危险度可能是AG基因型的1.85倍(P=0.0504);与健康和发病(康复、正发病和死亡)猪两个猪群中的发病相对危险度相关,GG基因型的发病相对危险度可能是AA基因型的0.513倍(P=0.0463);AG基因型的发病相对危险度可能是AA基因型的0.403倍(P=0.0073)。在杜长大猪中,HLA-B2基因多态性对伪狂犬抗体水平影响显著(P＜0.05),伪狂犬抗体水平由高到低的基因型为AA＞GG＞AG;GG基因型0日龄长白猪血红蛋白含量和红细胞压积显著地高于AA和AG的(P＜0.05)。5、猪Mx1基因第13外显子多态性与猪发病相对危险度显著相关,在健康猪、康复猪、正发病猪和死亡四个猪群中,CT基因型的发病相对危险度可能是CC基因型的2.041倍(P=0.0019);健康和发病(康复、正发病和死亡)猪群中,CT基因型的发病相对危险度分别可能是CC基因型的1.937倍(P=0.0056)。Mx1基因多态性与0日龄长白猪伪狂犬抗体差异极显著(P＜0.01),呈现CT＞CC＞TT的趋势;对0日龄长白猪PRRS抗体影响显著(P＜0.05),呈TT＞CC＞CT的趋势;分别对17日龄红细胞数、血红蛋白含量和红细胞压积影响显著(P＜0.05),均呈现CC＞CT＞TT的趋势。6、猪CXCL12基因第3内含子CXCL12-BsmAI位点多态性与猪发病相对危险度显著相关,在健康猪、康复猪、正发病猪和死亡猪四个猪群中,CG基因型的发病相对危险度可能是CC基因型的0.652倍(P=0.0235);对0日龄长白猪平均红细胞数体积影响显著(P＜0.05),呈GG＞CC＞CG的趋势;对17日龄长白猪伪狂犬抗体影响显著(P＜0.05),呈现CG＞CC=GG的趋势。猪CXCL12基因第3内含子CXCL12-BSTN1位点多态性对0日龄长白猪平均血红蛋白浓度影响显著(P＜0.05),呈GG＞AG＞AA的趋势;对17日龄长白猪血小板分布宽度、血小板体积、大血小板比率影响极显著(P＜0.01),均呈现AA＞GG＞AG的趋势;对32日龄长白猪白细胞数影响显著(P＜0.05),呈现AA＞AG＞GG。7、猪EHMT2基因第27内含子多态性与猪发病相对危险度显著相关,在健康猪、康复猪、正发病猪和死亡猪四个猪群中,GG基因型的发病相对危险度可能是TT基因型的2.414倍(P=0.0061);在健康和发病猪群(康复、正发病和死亡)猪中,GG基因型的发病相对危险度可能是TT基因型的2.411倍(P=0.031),差异均极显著。EHMT2基因不同基因型对杜长大猪瘟抗体、伪狂犬抗体影响极显著(P＜0.01),均有TT＞GG＞GT的趋势。