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目的:
为了探寻雌激素缺乏所致的骨质疏松症牙槽骨成骨能力与NF-κB的活化之间是否存在内在的联系,从而为骨质疏松症患者牙周炎的治疗提供研究基础。本实验通过卵巢切除建立雌激素缺乏小鼠模型,运用组织学方法观察卵巢切除小鼠组织病理学改变,逆转录PCR检测小鼠牙槽骨中成骨相关标记物的表达情况,以及免疫组化法和免疫印迹法检测小鼠牙槽骨中核转录因子κB(NF-κB)的活化情况和表达量的不同。
方法:
1.取20只3月龄雌性C3H的小鼠,随机分为两组:假手术组(A组)和卵巢切除组(B组)。切除双侧卵巢(或假手术),建立小鼠雌激素缺乏小鼠模型;
2.10周后,断颈处死两组小鼠。取小鼠牙槽骨,经过固定、脱钙、包埋、切片和HE染色等步骤,观察小鼠组织学差异;
3.处死后,立即取小鼠牙槽骨,剔除软组织后,提取总RNA,经过逆转录、PCR和电泳等过程,检测OCN和Runx2等成骨相关分子mRNA的表达;
4.采用免疫组化方法,观察两组小鼠牙槽骨中NF-κB蛋白表达情况;
5.应用免疫印迹法,经蛋白提取、转膜、封闭和显影等步骤,定量分析两组小鼠牙槽骨中NF-κB蛋白表达的差异。
结果:
1.卵巢切除小鼠,骨组织学表现为:骨小梁变细、数目减少、密度降低、结构不完整,骨吸收陷窝样结构增多;
2.RT-PCR结果显示:卵巢切除小鼠牙槽骨OCN mRNA相对表达量较假手术组低(0.1668±0.0470和0.5391±0.1293,p<0.05);Runx2 mRNA相对表达量较假手术组低(0.3064±0.0483和0.5817±0.1131,p<0.05);
3.免疫组化结果显示:卵巢切除小鼠的骨组织中NF-κB弱阳性表达;
4.Western-blot结果显示:卵巢切除小鼠牙槽骨中的NF-κB蛋白活化形式P65相对表达量较假手术组高(0.5854±0.0430,0.1045±0.0270,p<0.05)。
结论:
1.雌激素缺乏可引起牙槽骨成骨能力的降低;
2.雌激素缺乏导致的NF-κB信号通路激活,NF-κB可能参与抑制牙槽骨成骨形成过程。