论文部分内容阅读
目的克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,探讨对乳腺癌细胞的特异性,利用ShRNA/hTERT表达载体靶向沉默耐药乳腺癌细胞(MCF-7/ADR)及其裸鼠模型组织的乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因,观察它的mRNA变化、蛋白的表达及在细胞和动物实验的耐药性的变化。方法构建重组质粒(pGenesil-CMV-shRNA、pGenesil- hTERT-shRNA),分别转染端粒酶阴性及端粒酶阳性细胞,用MCF-7/ADR乳腺癌细胞接种于50只裸鼠前肢腋下,并将45只接种成功的动物模型按随机数字表法分为3组:对照组、重组质粒pGenesil-CMV-shRNA组、重组质粒pGenesil- hTERT-shRNA组,应用RT-PCR及Western-blot技术检测细胞及组织的BCRPmRNA、蛋白表达、裸鼠瘤体体积的变化及MTT法分析药敏性变化。结果端粒酶阳性的细胞可见很强的荧光,明显强于端粒酶阴性细胞;成功构建人乳腺癌裸鼠模型;细胞实验及动物实验RT-PCR及Western-blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制,裸鼠瘤体体积明显缩小,重组质粒pGenesil-hTERT-shRNA组抑瘤率为68.5%。MTT比色法结果显示:对阿霉素的药物敏感性明显提高,与对照组对照其差异均有显著性( P<0 .05)。结论ShRNA/hTERT表达载体成功靶向沉默BCRP基因,动物实验及细胞实验均证实对阿霉素的敏感性明显增加,这为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定实验基础。