感染性休克是常见危急重症,其病死率高达50%-60%以上。革兰阴性菌感染是常见原因,LPS在休克的发生和维持中扮演重要角色。休克发生后,细菌可以通过抗菌素杀灭,但杀灭后细菌裂解释放LPS,LPS与LBP结合后,被呈递给细胞表面CD14受体,通过糖基-磷脂酰肌醇定位于细胞表面上,但CD14缺乏跨膜及细胞内结构域,不能将信号传递到细胞内,只能通过结合跨膜信号传导蛋白发挥作用。TLR即是关键的跨膜信号传导蛋白,而TLR4是人类TLR的同源变体,它存在于单核细胞、中性粒细胞、心肌细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞,是参与天然免疫的关键受体。在MD2的参与下,LPS-CD14与TLR4结合,将信息传递到胞内,TLR4胞内区与蛋白-MyD88结合使MyD88活化,活化的MyD88结合于IRAK,并使后者活化,活化的IRAK结合于TRAF6可使TAK1活化,相继使NIK、I-kB活化,从而使I-kB与NF-kB分离,激发基因转录,使TNF-a合成释放增加,然后诱导其它炎症因子(如IL-1、IL-6等)释放,导致细胞线粒体、溶酶体损伤,微循环衰竭,进而引起心、肺、肝、肾、肠道等多器官功能损害,其中心肌受损引起心功能损害是导致休克的重要因素。cTnI是心肌细胞特有的结构蛋白,是反应感染性休克时心肌细胞受损的可靠指标,具有高度敏感性和特异性。中医认为,内毒素休克相当于厥脱证。由于感受外邪,内陷营血,耗伤气血,致热、毒、瘀互结,致脏腑功能衰竭,阴阳离决,阳气外脱,解毒活血为其主要治法。三七具有活血散瘀止血、止血不留瘀、解毒消肿作用。现代研究表明,三七主要成分为三七总皂苷,其中人参皂苷Rb1具有抗炎、止痛作用,人参皂苷Rg1和三七皂苷R1具有抗血小板聚集、抗血栓形成作用。动物实验发现三七总皂苷对内毒素休克大鼠心肌具有保护作用,深入探讨其作用机理具有重要临床意义。本研究分为整体动物实验和细胞培养实验两部分:1.整体动物实验部分1.1目的:观察三七总皂苷抗内毒素休克的疗效,并初步探讨其抗内毒素休克的机制。1.2方法:将SD大鼠随机分为生理盐水组、内毒素组、三七总皂苷小剂量组、三七总皂苷大剂量组、灯盏细辛组、牛磺酸组,相关药物处理3天后复制内毒素休克模型,观察动物平均动脉压、心率、左室收缩压,检测血清cTnI、血清及心肌组织TNF-α、及应用RT-PCR检测心肌组织TLR4mRNA表达。1.3结果:三七总皂苷1)可以明显改善内毒素休克大鼠左室收缩压,对稳定血压及心率具有重要作用,可延缓休克的发生。2)可以明显降低内毒素休克大鼠血清cTnI含量。3)抑制心肌TLR4mRNA表达,从而抑制血清及心肌TNF-α生成。1.4结论:三七总皂苷通过心肌组织TLR4mRNA表达,进而抑制血清及心肌组织TNF-α生成,减轻心肌细胞损伤,达到稳定血压及心率,改善心功能作用。2.体外实验部分2.1目的:观察三七总皂苷血清对内毒素诱导心肌细胞损伤的影响,初步探讨其可能的机制。2.2方法:制备三七总皂苷等药物血清,并进行心肌细胞培养。将培养的乳鼠心肌细胞分为6组,对照组加入制备的10%生理盐水动物血清,其余5组分别加入10%生理盐水、三七总皂苷小剂量、三七总皂苷大剂量、灯盏细辛、牛磺酸动物血清,培养48h后再予内毒素刺激,用MTT法观察他们对心肌细胞增值的影响。应用免疫组化检测上述动物血清对内毒素刺激后心肌细胞TNF-α、TLR4蛋白表达的影响。2.3结果:三七总皂苷药物血清1)可明显抑制内毒素诱导心肌细胞损伤;2)抑制内毒素刺激后心肌细胞TNF-α、TLR4蛋白表达。2.4结论:三七总皂苷明显降低心肌细胞本身TNF-α、TLR4蛋白表达,从而抑制炎性递质产生,达到保护心肌细胞作用。