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目的:观察RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein,BMP-7)的表达对人肝癌细胞增殖、迁移和周期的影响。方法:1、通过半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹(Western blot)技术从人肝癌细胞株Hep G2和SMMC7721中筛选出BMP-7基因高表达细胞株。2、设计并化学合成3对BMP-7小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,阳离子脂质体法瞬间转染BMP-7高表达肝癌细胞,并设Nomal Control组、Negative Control组及BMP-7-siRNA-1、BMP-7-siRNA-2、BMP-7-siRNA-3各转染组。3、采用RT-PCR和Western blot法检测转染后各组细胞BMP-7 m RNA和蛋白的表达变化,筛选BMP-7最佳沉默序列进行后续实验。4、通过MTT比色法检测各组细胞增殖能力变化并绘制细胞生长曲线。5、Transwell迁移实验检测各组细胞迁移能力。6、通过Western blot法检测转染后各组细胞中凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)的表达情况。7、流式细胞术检测各组细胞周期分布。结果:1、RT-PCR及Western blot结果显示:2种肝癌细胞株均有BMP-7基因表达,其中以Hep G2细胞BMP-7相对表达量最高。选择Hep G2细胞进行后续实验。2、BMP-7-siRNA转染6-24 h后,在荧光显微镜下观察Hep G2细胞绿色荧光蛋白表达情况,随机取10个视野,计数含绿色荧光的转染细胞占正常细胞的百分比来评价转染效率。结果显示转染效率达91.33%±2.082%。3、3个特异性BMP-7-siRNA序列转染细胞24 h或48 h后,其BMP-7的m RNA或蛋白表达较Nomal Control组、Negative Control组均有所下调,其中BMP-7-siRNA-3组沉默效果最佳(P<0.01),而Negative Control组与Nomal Control组间差异无显著性(P>0.05)。选择BMP-7-siRNA-3序列进行后续实验。4、MTT法描绘细胞生长曲线显示,转染后48 h、72 h,BMP-7-siRNA-3组细胞增殖生长能力较Normal Control组及Negative control组明显受到抑制(P<0.01)。而Negative Control组与Nomal Control组间差异无显著性(P>0.05)。5、Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP-7-siRNA-3组细胞穿膜数明显少于Nomal Control组和Negative-siRNA组(P<0.01),而Negative Control组与Nomal Control组间差异无显著性(P>0.05)。6、Western blot检测结果发现BMP-7-siRNA-3组与Nomal Control组及Negative Control组相比,细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达增加(P<0.01),Bcl-2表达无明显变化(P>0.05)。而Negative Control组与Nomal Control组间差异无显著性(P>0.05)。7、流式细胞仪检测细胞周期实验显示,转染后48 h,BMP-7-siRNA-3组与Nomal Control组及Negative Control组相比,出现G2期阻滞,G0-G1期细胞显著减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。而Negative Control组与Nomal Control组间差异无显著性(P>0.05)。结论:siRNA介导BMP-7基因沉默后,可抑制人肝癌Hep G2细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡,并阻滞细胞周期在G2期。