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背景:蝉翼藤民间被用来治疗炎症和类风湿关节炎（RA）。近年来蝉翼藤的抗炎抗风湿作用已被充分证实,课题组前期研究表明蝉翼藤醇提物相对于水提物效果更显著。通过研究蝉翼藤的醇提物不同极性萃取部位,发现其二氯甲烷部位（SI D）具有抗风湿潜力。SID的分离获取了以占吨酮（XAN）为代表的多种潜在活性成分。体内实验也表明,XAN对佐剂性关节炎（AA）产生有效的治疗作用。XAN是一种多酚,它的结构高度对称,在蝉翼藤中不仅含量高,而且种类也相当丰富,结构分析显示仅有甲氧基和羟基取代,这提示它对科学研究有着非常重要的意义。蝉翼藤药材中除XAN外,还存在苯丙酸、二苯酮等芳香族衍生物,它们跟X AN具有密切的生源关系和α,β-不饱和羰基的共性结构特征,推测它们可能具备与XAN相似的生理活性,对蝉翼藤的RA治疗作用具有特定的贡献。因此本研究是在前期研究的基础上合理有序的推进,为遴选出蝉翼藤药材抗类风湿性关节炎活性组分,进一步明确其药效基础而设计的。目的:在建立蝉翼藤中富多酚组分（PRF）富集纯化工艺的基础上,利用脂多糖（LPS）诱导的急性炎症模型,论证PRF相对于非酚组分（PDF）具有更好的抗炎活性,完成PRF与PDF的抗炎作用差异的评价,初步探索PRF作为潜在抗类风湿活性部位的抗炎机制;在此基础进一步评价PRF对胶原诱导关节炎（CIA）大鼠的治疗作用,确证该组分为抗风湿的物质基础;同时构建PRF自微乳,通过与溶液剂在体内的治疗效果的比照,明确其相对于传统给药方式具有更好的治疗效果。方法:1.采用大孔树脂结合化学方法建立蝉翼藤中PRF组分的富集、纯化工艺。以1,7-二羟基-3,4-二甲氧基山酮（S-XAN）和阿魏酸为对照物,采用HPLC-UV结合福林酚比色法分析各组分中总酚含量,评估转移效率和敲出效果。通过1H-NMR分析芳香族质子的特征信号,用质子峰相对强度评估混合物中多酚的分布。2.蝉翼藤PRF与PDF抗炎活性差异的评价主要通过LPS诱导的急性炎症模型完成。两种组分的抗炎活性差异评价通过多种指标综合评估:肺泡水肿程度或肺泡壁增厚情况,肺泡出血程度和中性白细胞浸润,CBC全血分析结果,MDA和TNF-α水平等。PRF抗炎机制研究通过对RAW264.7细胞分析来完成,分析细胞中ROS、NAMPT、Sirt1、HMGB1、TLR4、p-p65的表达水平,并结合普鲁士蓝染色,免疫印迹法和流式细胞仪分析可能的信号通路与炎症效应之间的相关性。3.蝉翼藤PRF自微乳载药体系的构建主要通过绘制伪三元相图结合正交试验来完成,并通过测定包封率,粒径分布,电子扫描显微镜技术进行表征。4.采用牛二型胶原建立CIA大鼠模型,予以PRF溶液及PRF自微乳分别治疗,研究蝉翼藤PRF对实验性关节炎大鼠的治疗作用及两种给药方案不同的治疗效果。主要评价内容包括:附属组织的炎症,肿胀程度,关节软骨的侵蚀程度,滑膜的增生肥大程度,血清中致炎因子白介素-1β（IL-1β）,肿瘤坏死因子-α（T NF-α）等浓度水平,p-p65免疫组织化学指标。结果:1.确定选择HPD300大孔树脂富集蝉翼藤中PRF组分条件为:上样量为25.08mg·g-1干树脂、上样浓度为1.881mg·ml-1、上样速度为1BV·h-1、洗脱剂为4BV的75%乙醇、洗脱速度为2BV·h-1、洗脱用水体积为3BV。福林酚法定量分析PDF和PRF中的总多酚质量浓度分别为1.53%和12.69%。1H-NMR结果显示PDF和PRF芳族质子分别占总信号强度的0.44%和5.51%。通过与以前分离的化合物的比较,发现S-XAN是PRF的主要化学成分。2.蝉翼藤PRF组分抗炎活性优于PDF组分,PRF能有效降低MDA水平,抑制NAMPT/Sirt1表达,减轻了炎症的严重程度。此外,PRF能显著下调接受LPS处理过的RAW264.7细胞中ROS、NAMPT、Sirt1、HMGB1、TLR4、p-p65的表达。PRF的这些下调作用被烟酰胺单核苷酸刺激引起NAMPT的上调而大大消除了,并被N-乙酰L-半胱氨酸的联合治疗而掩盖。结果表明,PRF对TLR4/NF-κB通路的抑制作用是通过NAMPT信号介导的,其跟随细胞内氧化应激水平的变化而产生波动。3.蝉翼藤PRF自微乳处方组成为肉豆蔻异丙酯-聚氧乙烯-35蓖麻油-异丙醇。确定最优处方油量15%,km值为2,药物浓度2.5%。自乳化得到的乳滴经电镜下观察,为球形或近球形的颗粒,平均粒径在20nm。4.蝉翼藤PRF溶液和PRF自微乳对实验性关节炎动物均具有确切的治疗作用,证实PRF是蝉翼藤中抗炎抗风湿的重要活性成分,表现为附属组织的肿胀程度的缓解,滑膜增生等症状得到有效控制,血清中相关促炎因子水平的降低,滑膜组织中异常的指标得到恢复性的调节,且PRF自微乳的疗效相对于PRF溶液治疗效果更优。结论:蝉翼藤中特定结构芳香族衍生物对CIA模型大鼠有确切的治疗作用,是该民族药的RA治疗的重要物质基础,并通过构建PRF自微乳提升了抗风湿治疗效果。实验过程中,在评价PRF与PDF抗炎活性差异时,揭示了蝉翼藤PRF组分一种独特的抗炎机制:通过对NAMPT的下调,抑制TLR4/NF-κB通路激活,实现抗炎作用。