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流行病学数据显示,宫颈癌作为女性第四常见的恶性肿瘤,每年都引起较高发病率和死亡率。截止2015年,美国已有至少12900例新发宫颈癌病例,4100例死亡。而在亚、非等不发达国家,以上数据更加显著。宫颈癌的发生发展是一个连续的过程,正常宫颈鳞-柱交界转化区受到人乳头瘤病毒等致癌因素刺激,细胞排列紊乱、分化不良、异常增生,发生宫颈上皮内瘤变,随病变进展,最后发展为宫颈癌。随着宫颈癌筛查手段的不断提升,中晚期宫颈癌发生逐年下降,然而手术以及放、化疗仍不能达到满意疗效。目前迫切需要一种有效、减毒的新治疗方式,而分子靶向治疗则为其带来曙光。人Cripto-1基因最早于人畸胎癌细胞系中分离得到,因此又称为畸胎癌衍生生长因子一1(teratocarcinoma-derived growth factor-1,TDGF-1)。作为表皮生长因子-CFC (epidermal growth factor-cripto-1/FRL1/cryptic, EGF-CFC)家族一员,具有典型的结构,主要包括一个氨基末端信号序列,一个可变的EGF结构域,一个保守的CFC结构域,和一个羧基末端疏水区。Cripto-1不仅在胚胎干细胞发育过程中发挥重要作用,同时与恶性肿瘤细胞侵袭、转移、增殖等息息相关。已有数据显示,Cripto-1在成人正常组织中保持一个不表达或低表达状态,而在胃癌、乳腺癌等恶性组织中高表达。宫颈癌中,已有研究在细胞水平上证实,Cripto-1通过作用于其下游因子调控宫颈癌细胞生存以及侵袭转移过程；组织水平上,也有研究发现,Cripto-1在不同宫颈组织中表达存在差异,进一步提示其在宫颈癌发生发展中的作用。PI3K/Akt信号传导通路作为联系胞外信号和胞内应答的桥梁,在恶性疾病发生、发展、治疗等过程中发挥重要作用。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamyein, mTOR)作为其下游一个重要分子,参与了细胞生长、增殖等多个重要过程。目前在宫颈癌中的研究发现,PI3K/AKT/mTOR在宫颈癌组织中呈过度活化状态,其可能与肿瘤细胞增殖、细胞周期调控等有关。此外,也有人发现,mTOR水平影响宫颈癌放疗、化疗的疗效。目的本课题通过对正常宫颈组织(normal cervical epithelium, NCE)、宫颈上皮内瘤变组织(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)以及宫颈浸润鳞癌组织(invasive carcinoma of cervix, ICC)中Cripto-1、p-AKT以及mTOR的表达水平并结合相关临床病理学参数进行分析,探讨在宫颈鳞癌发生发展过程中,Cripto-1与PI3K/AKT/mTOR通路之间存在的关系,从而为指导宫颈鳞癌预后以及靶向治疗等提供新的线索。方法分别收集Ⅰ-Ⅱ期宫颈鳞癌28例、Ⅱ-Ⅲ级宫颈上皮内瘤变38例、无宫颈病变患者40例的宫颈组织分成以上三组。分别应用免疫组化SP法以及Western Blot法检测三组宫颈组织中Cripto-1、p-AKT、mTOR的表达水平,并结合相应的临床病理参数进行分析。结果1.免疫组化法示：Cripto-1在宫颈鳞癌组、宫颈上皮内瘤变组、正常宫颈组中阳性表达率分别为60.7%(17/28)、31.6%(12/38)、7.5%(3/40)。p-AKT在三组中阳性表达率分别为78.6%(22/28)、52.6%(20/38)、10%(4/40)。mTOR在三组中阳性表达率分别为64.3%(18/28)、34.2%(13/38)、12.5%(5/40)。Cripto-1、p-AKT、mTOR表达水平均满足宫颈鳞癌组高于宫颈上皮内瘤变组,而宫颈上皮内瘤变组高于正常宫颈组。2.在Ⅰ-Ⅱ期宫颈鳞癌中,Cripto-1的表达水平与疾病分期、有无淋巴结转移有关,而与患者年龄、肿瘤分化程度无关。P-AKT的表达水平与患者年龄、疾病分期、有无淋巴结转移、肿瘤分化程度均无关。mTOR的表达水平与有无淋巴结转移有关,而与患者年龄、疾病分期、肿瘤分化程度无关。3.在Ⅰ-Ⅱ期宫颈鳞癌中,Cripto-1表达水平与p-AKT之间呈正相关。Cripto-1蛋白表达与mTOR蛋白表达呈正相关,p-AKT蛋白表达与mTOR蛋白表达呈正相关。4. Western Blot法检测,Cripto-1在宫颈鳞癌组表达为0.82±0.44,宫颈上皮内瘤变组为0.37±0.12,正常宫颈组为0.07±0.03。p-AKT在宫颈鳞癌组为0.66±0.37,宫颈上皮内瘤变组为0.32±0.20,正常宫颈组为0.12±0.09。mTOR在宫颈鳞癌组为0.63±0.33,宫颈上皮内瘤变组为0.45±0.20,正常宫颈组为0.15±0.09。Cripto-1、p-AKT、mTOR表达水平均满足宫颈鳞癌组高于宫颈上皮内瘤变组,而宫颈上皮内瘤变组高于正常宫颈组。结论1. Cripto-1、p-AKT、mTOR的表达水平在三组宫颈组织中存在差异,并且ICC组中表达水平高于CIN组,CIN组高于NCE组,提示三个因子可能参与宫颈癌的发生发展。2.Ⅰ-Ⅱ期宫颈鳞癌组织中,Cripto-1与p-AKT之间,Cripto-1与mTOR之间,mTOR与p-AKT之间均呈正相关关系,提示Cripto-1可能通过PI3K/AKT/mTOR通路发挥作用。3.Ⅰ-Ⅱ期宫颈鳞癌组织中,Cripto-1表达与疾病分期及有无淋巴结转移有关,mTOR的表达水平同有无淋巴结转移有关,提示Cripto-1可能通过PI3K/AKT/mTOR通路影响Ⅰ-Ⅱ期宫颈鳞癌的淋巴结转移过程。