【摘 要】
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多肽生长因子的发现及其与创面愈合之间关系的研究，向人们展示了其巨大的临床应用潜力，但目前存在其应用时难以在创面局部维持有效的生物学浓度及应用时尚没有令人满意的联合应用的手段。分子生物学的发展，尤其是外源性某些蛋白质的cDNA在角朊细胞内成功表达及分泌的研究，向人们展示了新的途径。 为探讨人角朊细胞能否有效地被改造成一种分泌所需生长因子的载体，以便最后试用于创面，选用了两种具有协调作用生长因子
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多肽生长因子的发现及其与创面愈合之间关系的研究，向人们展示了其巨大的临床应用潜力，但目前存在其应用时难以在创面局部维持有效的生物学浓度及应用时尚没有令人满意的联合应用的手段。分子生物学的发展，尤其是外源性某些蛋白质的cDNA在角朊细胞内成功表达及分泌的研究，向人们展示了新的途径。 为探讨人角朊细胞能否有效地被改造成一种分泌所需生长因子的载体，以便最后试用于创面，选用了两种具有协调作用生长因子的基因hEGF cDNA和hbFGF cDNA，做为目的基因，将其分别克隆入真核表达载体pcDNA3-neo内构建了真核表达载体pcDNA3-hEGF和pcDNA3-hbFGF；利用脂质体转染法，将其分别导入体外培养的正常人角朊细胞，利用G418（geneticin）对转染后的细胞进行筛选纯化后，经核酸分子原位杂交确认是两个载体均被成功地导入正常培养的人角朊细胞内，进一步应用免疫细胞化学，放射免疫分析及中和抗体拮抗实验；证明两种转基因后的人角朊细胞，其胞浆内分别有hEGF和hbFGF翻译表达，转基因hEGF cDNA的角朊细胞可向胞外较高水平地稳定释放hEGF，初步鉴定转基因后的角朊细胞有特异性hEGF和hbFGF活性物质向胞外释放。
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