昆白小鼠体细胞核移植

来源 :西北农林科技大学 西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dvluxiang
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  自1998年首例体细胞克隆小鼠成功后,克隆小鼠不仅在数量和品系上不断增多,而且供核细胞种类和也在增加。昆白小鼠体细胞克隆未见成功报道,昆白小鼠是我国自主繁殖的近交系小鼠,由于遗传背景清楚、生殖周期短、环境适应能力强等优点,是国内良好的实验动物模型。昆白小鼠的体细胞克隆不仅对克隆机理研究,而且对遗传学、胚胎学和分子生物学等领域都有重要的意义。   本研究从4个方面对昆白小鼠体细胞核移植进行了研究:供体细胞的采集、Spindle-view对卵母细胞的去核效率的影响,活力检测和核型分析,不同注核方法对克隆效率的影响。1.通过对分离培养的1-6代的供核细胞进行核型分析和活力测定,各代间核型正常,细胞活力无显著性差异(P>0.05),证明用1-6代的细胞作为供核细胞是可行的。2.Spindle-view协助的卵母细胞去核。分别用Spindle-view协助和盲吸法对注射hCG后10和12h的小鼠卵母细胞去核,用Spindle-view协助的去核率分别为95﹪和87﹪,用盲吸法为90﹪和22﹪。因此用Spindle-view协助下对hCG后10h卵的去核不仅去核率高,而且对卵母细胞损伤小。3.培养液和激活方法的筛选。用正常胚胎筛选培养液,CZB和M16克服2细胞阻滞的比率分别为76.9﹪、56.2﹪,经检验发现差异显著(P<0.05),胚胎其他发育阶段虽无显著性差异(P>0.05),但CZB比M16稍高,因此选用CZB培养重组胚。分别用电刺激,酒精,SrCl2和钙离子载体4种不同的激活方法对卵母细胞的激活,激活率分别为40.8﹪、90.1﹪、60.3﹪、88.4﹪,发现用酒精和SrCl2激活效果较好,两组发育到桑椹胚的比率分别为16.4﹪和3.6﹪,经比较酒精激活比SrCl2激活效果好(P<0.05)。4.不同注核方法对克隆效率的影响。用卵周隙注射和卵胞质注射两种方法注核发现用电融合方法融合率34.8﹪,有13枚重构胚卵裂,其中3枚发育到3-4cell,1枚发育到6-cell,卵胞质注射成功率8.2﹪,激活培养后没有卵裂的。因此卵周隙注射优于卵胞质注射。
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