核酸作为遗传信息的载体,其检测被广泛的应用在食品安全、生物医学检测、环境检测等诸多领域。近几年,核酸等温扩增检测方法因其具有简便、快速、易操作的优点得到了迅速的发展,适用于现场即时检测,这使其成为现在的研究热点。因此,利用核酸等温扩增方法发展设计简单、易于操作和灵敏快速的生物分子检测新方法成为生化分析领域的主要目标,这也是本论文的主要研究内容。本论文首先阐述了RNA“一步法”检测的酶学基础研究。近年来,RNA检测已成为分子生物学、医学诊断和药物发现中最重要的部分之一,常规的RNA检测技术需要首先进行额外的反转录,步骤复杂,限制了RNA快速检测技术的现场应用。第二章描述了RNA快速检测的酶学基础研究,发现Bst和Klenow DNA聚合酶有内在的反转录酶活性,可将反转录和扩增两过程合二为一,从而实现RNA“一步法”快速检测。本论文分别用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳和反转录-聚合酶链式反应证明了Bst和Klenow DNA聚合酶对65 nt长度范围内的RNA具有与反转录酶相媲美的反转录酶活性,且其反转录产物c DNA可作为PCR等扩增技术的有效模板。因此,利用这几种DNA聚合酶兼具DNA聚合酶和反转录酶活性的性质,可以简化检测步骤,开发一系列RNA“一步法”快速检测的新技术,这对RNA的现场检测有重要的意义,可以满足未来生物分析、检验检疫及临床诊断的需求。核酸适配体能够进行体外合成与扩增,并与多种目标物质高特异性、高选择性地结合,被广泛应用于核酸等温扩增技术的检测中。因此自出现以来一直是科学家们的研究热点,在实验试剂诊断、基因调控和新药研发等方面具有广阔的应用前景。在第三章中,选用适配体的明星靶标-凝血酶对筛选过程进行了初步验证,为以后构建适配体筛选实验奠定基础。该方法设计一条发卡DNA作为分子开关,该发卡结构的环部含有凝血酶的适配体序列,凝血酶与适配体序列特异性结合,导致茎环结构发生改变,裸露出的3’端再在两条特异性引物,Nt.Alw I切刻内切酶和Klenow(exo-)DNA聚合酶联合作用下,引发链置换扩增反应,经双重循环扩增后,信号被级联放大,实现了对凝血酶的灵敏性检测,检测限达2.6×10-12mol/L,且在人的血清样本中显示了较强的抗干扰能力和特异性。由此初步证明了该技术的可行性,这将对其他已筛选出适配体序列的生物分子的检测提供新的思路和技术支撑,也对适配体筛选实验奠定了基础,对分子筛选和分子进化等有重要意义。