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目的:观察乙状结肠痛刺激后,原癌基因c—fos在脑实质内远位触液神经元的表达,探讨远位触液神经元在内脏伤害性刺激调控中的可能作用。
方法:雌性成年SD大鼠(250~280g),侧脑室注射30%霍乱毒素亚单位B与辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP),首先追踪标记出脑实质内远位触液神经元;动物存活48h后,进一步在乙状结肠壁粘膜下定量注射福尔马林制作乙状结肠急性炎性痛模型,并设立生理盐水对照组和空白对照组,对各组进行疼痛行为学评分后,取材大鼠相关脑区做连续冠状切片,进行CB-HRP/Fos免疫组织化学双重染色,显示并计数CB—HRP标记神元,Fos阳性神经元,CB-HRP/Fos双重标记神经元的表达。
结果:1行为学表现:在乙状结肠壁粘膜下定量注射Formalin致痛组,大鼠出现肋腹部收缩(F),腹部收缩(A),伸展身体(B),间有穿插舔腹部或外阴区域(L)等典型的内脏痛行为学表现,疼痛学评分明显升高;生理盐水对照组大鼠在麻醉恢复后也表现出轻微的内脏痛的行为反应,主要表现为舔腹部或外阴区域,疼痛学评分较低,以上两组疼痛学评分差异有显著性(P<0.01)。空白对照组大鼠四种内脏痛的行为学表现不明显,疼痛学评分为0。2.CB-HRP标记神经元及其Fos蛋白表达:各组大鼠脑实质的恒定部位均可见有大量聚集分布的CB-HRP标记神经元。乙状结肠壁粘膜下定量注射Formalin致痛组,CB-HRP标记神经元聚集区见有三种不同标记神经元:CB—HRP标记神经元,Fos表达神经元和CB-HRP/Fos双重标记神经元,其中CB-HRP标记神经元每张切片上约35.2±8.8个,Fos阳性神经元每张切片上约42+10.5个,CB-HRP/Fos双重标记神经元每张切片上约14.8±5.6个,约41%左右的CB-HRP神经元有与Fos的双重标记(CB-HRP/Fos);生理盐水组和空白对照组CB-HRP标记神经元的位置和数量与Formalin致痛组无显著性差异(P>0.05);生理盐水组的CB-HRP标记神经元聚集区每张切片上仅有8.5±2.5个Fos阳性神经元,未见CB-HRP/Fos双标神经元,与Formalin致痛组相比,差异具有显著性(P<0.01);空白对照组的CB-HRP标记神经元聚集区几乎未见Fos阳性神经元及CB-HRP/Fos双标神经元。3.乙状结肠壁粘膜下定量注射Formalin致痛组大鼠疼痛行为学评分的高低与CB-HRP标记神经元聚集区。Fos阳性神经元的数量多少成正比。
结论:在大鼠脑实质的特定部位恒定存在远位接触脑脊液细胞团。且当给予乙状结肠害性刺激时,原癌基因c-fos在远位触液神经元表达数量显著增加,并与疼痛行为学评分的高低成正比,提示脑内远位触液神经元可能参与了机体对内脏伤害性刺激信息传递或调控。