蜜蜂病毒与东方蜜蜂微孢子虫对熊蜂的跨种侵染

来源 :云南农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:licarson
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
熊蜂作为一种重要的授粉昆虫在维持农业可持续发展、农作物的多样性和提高农产品质量与产量方面起着重要作用。但近年来由于病毒、寄生虫等病原物引发的疾病可能会影响熊蜂的生态、分布及其商业授粉应用,对农业生态系统已造成显著的负面影响。近期国内外学者相继发现黑蜂王病毒(BQCV)与残翅病毒(DWV)等蜜蜂病毒和东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)可跨种侵染熊蜂,而我国关于蜜蜂病原物侵染熊蜂的病理研究报道仍为空白。故本文采用RT-PCR、qRT-PCR技术、荧光显微镜技术、电镜技术等围绕BQCV、DWV对熊蜂的侵染、N.ceranae的检测鉴定及对小峰熊蜂的侵染开展研究。结果主要为以下三个部分:1)对熊蜂体内的7种蜜蜂常见病毒(ABPV、BQCV、CBPV、DWV、KBV、IAPV、SBV)进行了检测,其中:小峰熊蜂与红光熊蜂BQCV感染率分别为19.50%和20%,而DWV感染率分别为5.5%和4%。对BQCV与DWV的RNA正负链检测得出BQCV在小峰熊蜂幼虫中的负链阳性率较高(36%),DWV则在小峰熊蜂工蜂中的负链阳性率较高(12%)。qRT-PCR定量分析发现,与小峰熊蜂相比,红光熊蜂幼虫感染BQCV量最高,红光熊蜂工蜂的感染量最低,但红光熊蜂工蜂DWV感染量最高,红光熊蜂雄性蜂DWV感染量最低。2)在扫描电镜下观察N.ceranae发现其呈现椭圆形且表面有粗糙褶皱。在透射电镜下观察N.ceranae的内部结构验证了孢子壁较厚且由内至外有三层结构,极丝管环绕于核周围且具有四层结构。通过荧光染色试剂Calcofluor WhiteM2R与核酸染料Sytox Green双重染法来鉴别N.ceranae孢子的存活状态,死孢子呈现黄绿色荧光,活的呈现蓝白色荧光,而寄主细胞、细菌、病毒等不被染色。3)熊蜂感染N. ceranae后,初期工蜂除取食减少和行动迟缓外无明显外观染病特征,后期工蜂萎靡,衰弱,飞翔无力。解剖后镜检发现中肠仅存少量孢子,但充满大量的细菌;熊蜂肠道组织切片发现其侵染中肠上皮细胞后导致核膨大并变形、线粒体体积变小甚至解体,内质网紊乱,但孢子只侵染寄主细胞质而不侵入细胞核,最终导致线粒体解体,细胞破裂;qPCR定量分析得出在接种的3-4d中肠和脂肪体中N. ceranae的感染量达到最高值,其他组织则基本未检测到。结论:首次在国内饲养熊蜂上发现BQCV和DWV两种蜜蜂病毒;通过双重荧光染色鉴别N.ceranae孢子的活性,并初步确定N. ceranae可跨种侵染熊蜂。
其他文献
虽然MLPH基因在人,小鼠,狗等物种中已经被确定为毛色位点稀释基因,但在山羊中的研究相对较少。本实验对照GenBank上已有的牛(NC007301)的MLPH基因序列进行设计引物,扩增山羊MLP
我国是鸭养殖和消费大国,但是随着养殖量的日益增加疾病也逐年增加并日趋复杂,尤其是育雏期饲养密度大且雏鸭的免疫功能尚未健全导致发病的机会增大,给水禽业造成巨大经济损失。