【摘 要】
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目的探讨Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）)介导的自噬流异常在可溶性尿酸（uric acid,UA）刺激肾小管上皮细胞（HK-2细胞）炎症反应中的作用。方法用可溶性尿酸溶液刺激HK-2细胞24h后,RT-q PCR检测MCP-1的m RNA表达情况,Western blotting检测MCP-1的蛋白表达情况;细胞内自噬小体及自噬溶酶体采用透射电子显微镜下观察。可
【基金项目】
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项目名称:CD4+CD28-T淋巴细胞与胸膜间皮细胞相互作用在结核性胸膜炎机制中的作用研究,项目合同编号:03101213038D,项目来源:国家自然科学基金项目,项目起止时间:2014.01-2018.12; 项目名称:TLR4受体介导自噬流障碍对可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞炎症反应的调控机制,项目合同编号:2018GXNSFAA050057,项目来源:广西自然科学基金项目,项目起止时间:201
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目的探讨Toll样受体4（Toll-like receptor4,TLR4）)介导的自噬流异常在可溶性尿酸（uric acid,UA）刺激肾小管上皮细胞（HK-2细胞）炎症反应中的作用。方法用可溶性尿酸溶液刺激HK-2细胞24h后,RT-q PCR检测MCP-1的m RNA表达情况,Western blotting检测MCP-1的蛋白表达情况;细胞内自噬小体及自噬溶酶体采用透射电子显微镜下观察。可溶性尿酸或（和）氯喹（CQ）刺激HK-2细胞12h,Western blotting检测LC3-II和P62的蛋白表达情况。可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TLR4抑制剂TAK242共同孵育细胞4h,RT-q PCR检测TLR4的m RNA表达情况;可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TLR4抑制剂TAK242共同孵育细胞24h,Western blotting检测TLR4、LC3-II、和P62的蛋白质表达情况;自噬双标腺病毒（m RFP-GFP-LC3）转染HK-2细胞后,共聚焦显微镜下观察细胞内自噬流变化。可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TAK242和（或）CQ共同孵育细胞24h,Western blotting检测MCP-1的蛋白质的表达情况。结果可溶性尿酸刺激HK-2细胞MCP-1的m RNA和蛋白质表达上调（P<0.05）。透射电子显微镜下观察到自噬小体增多,自噬溶酶体少见,提示自噬流受阻。可溶性尿酸可刺激HK-2细胞LC3-II和P62的蛋白质表达上调（P<0.05）,可溶性尿酸和CQ共同处理后LC3-II,P62的蛋白质表达进一步增加（P<0.05）。TAK242与可溶性尿酸共同刺激HK-2细胞后,与正常对照组相比,可溶性尿酸诱导TLR4的m RNA表达水平上调（P<0.05）,而TAK242则抑制可溶性尿酸诱导的HK-2细胞TLR4m RNA表达水平（P<0.05）;TAK242与可溶性尿酸共同刺激HK-2细胞后,Western blotting结果显示,与正常对照组相比,可溶性尿酸诱导TLR4、LC3-II和P62的蛋白质表达水平增高（P<0.05）,而TAK242可抑制可溶性尿酸诱导的HK-2细胞TLR4、LC3-II和P62的蛋白质表达水平（P<0.05）;共聚焦显微镜下结果显示,可溶性尿酸组与对照组相比,自噬小体水平显著增多,且自噬溶酶体水平较低;而与TAK242+UA组相比,TAK242+UA组自噬小体水平减少,自噬溶酶体水平相对增多,表明自噬小体与溶酶体融合现象增多,形成自噬溶酶体受阻情况有改善。可溶性尿酸加上TAK242和（或）CQ孵育细胞24h后,TAK242可抑制可溶性尿酸刺激HK-2细胞产生的MCP-1的蛋白质表达（P<0.05）,CQ增强可溶性尿酸刺激HK-2细胞MCP-1的蛋白质表达（P<0.05）;而UA+TAK242+CQ组与UA+TAK242组及UA+CQ相比,MCP-1的蛋白质表达水平均增加（P<0.05）。结论可溶性尿酸可刺激肾小管上皮细胞炎症反应;可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞自噬流受阻;可溶性尿酸可通过TLR4介导肾小管上皮细胞自噬流异常;TLR4可通过调控自噬流异常介导可溶性尿酸刺激的肾小管上皮细胞的炎症反应。
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