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脂肪是生物体重要的储能物质,其分解产物脂肪酸又是生物体重要的结构物质和活性物质。脂蛋白脂肪酶能够分解脂肪,在生物体脂肪代谢及其相关脂类调控中发挥着重要的作用。在鱼类中存在着两种脂蛋白脂肪酶(LPL1、LPL2)。目前对于鲤鱼LPL结构及功能方面的研究还没有报道,所以本文选取鲤鱼为研究对象,阐明了鲤鱼LPL基因的表达及其功能情况。利用RT-PCR的方法分离了鲤鱼LPL1和LPL2编码区cDNA全长序列,克隆结果表明,鲤鱼LPL1和LPL2开放阅读框(ORF)分别为1524 bp和1503 bp,分别编码507个和500个氨基酸。同源分析结果表明,LPL1和LPL2氨基酸序列相似性为45.51%。氨基酸功能位点分析表明,LPL1、LPL2的N-糖基化位点分别为85N、401N和400N,肝素结合域分别为321R-323N和319R-321N,催化活性位点分别为174S、198D、283H和172S、196D、281H,二聚体形成的保守疏水残基位点分别为218A、230G、237G和216A、228G、235G。系统进化分析表明,鲤鱼LPL1、LPL2与不同纲动物的LPL1、LPL2之间的遗传距离与分类地位基本一致,进化树很好的显示了鱼纲不同科、目的系统发育水平。利用实时荧光定量PCR检测了 iPL1、LPL2在鲤鱼不同组织中的表达情况,结果显示,LPL1和LPL2在不同组织中均有表达,在肝脏中表达量最高,其次为心脏、脂肪、肌肉、脑、中肾,在前肠中表达量最低,在所有组织中,LPL1的表达量始终高于LPL2的表达量。利用酶联免疫法和BCA全蛋白测定法测定了鲤鱼心脏、脂肪、肌肉、肝脏等组织中的脂蛋白脂肪酶含量,结果发现,这与LPL在mRNA水平上的表达量一致。LPL1和LPL2原核表达蛋白成功地在大肠杆菌中获得且使用Ni柱纯化。使用对硝基苯酚法(pNP)测定了 LPL1和LPL2酶活,结果表明,LPL1和LPL2酶活的最适温度均为35℃,最适pH均为8.0,在最适温度和pH条件下,LPL1和LPL2的酶活分别为22.69U/g、17.4U/g。很显然,两者序列差异导致了蛋白酶活不同。