论文部分内容阅读
悬铃木是著名的行道树和园林绿化树种,冠大荫浓,遮阴效果好,能够吸尘、抗菌、净化空气,其木材也可用作建筑和家具。然而在美化城市环境的同时,悬铃木球果破碎产生的果毛、雄花产生的花粉也给人们的生活带来了极大的危害,悬铃木的果毛及花粉能够导致人们哮喘、皮肤过敏等疾病。为此,国内外研究人员进行了大量的研究,以期解决悬铃木果毛污染问题。基于此,本研究以悬铃木幼苗为外植体,进行悬铃木愈伤组织的诱导；以悬铃木无菌苗叶片及茎段为外植体,进行悬铃木不定芽的诱导,建立了悬铃木再生体系,同时,本研究系统分析了外植体选择、叶龄、激素类型等因素对悬铃木愈伤诱导和不定芽再生的影响,然后对悬铃木遗传转化体系进行了初步研究,为进一步构建悬铃木转基因系统奠定了基础。研究内容包括以下几个方面：采用悬铃木幼苗,是进行愈伤组织诱导的最佳外植体。消毒外植体时,用0.1%HgCl2处理幼苗8min是幼苗消毒的最佳方法；诱导愈伤时,选用1/2MS附加0.1mg/L IBA和0.1mg/LNAA,愈伤诱导率好,周期短。采用悬铃木无菌苗茎段,是进行悬铃木不定芽诱导的最佳外植体。选择苗龄为30-50d的无菌苗诱导效果最好；将外植体接种于培养基上先进行7d暗培养,有助于不定芽诱导；不定芽诱导时,选用MS附加0.1mg/L IBA,1.0mg/L6-BA和1.5mg/LKT,不定芽诱导率最高,丛芽长势最好。通过对影响悬铃木遗传转化因素的探讨,对悬铃木遗传转化条件进行了初步的研究。对悬铃木幼苗整株浸染,用农杆菌菌液OD600为1.0浸染36h,并在共培养时加入AS, GUS瞬时表达率最高,为18%；对悬铃木愈伤组织浸染时,用农杆菌菌液OD600为0.8浸染40min,并在共培养时加入AS, GUS瞬时表达率最高,为62%。本实验初步确定了悬铃木遗传转化条件,这为后期获得转基因悬铃木植株奠定了基础。