泌尿系草酸钙结石蛋白分析

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目的:研究泌尿系草酸钙结石蛋白成分特点,为进一步探索结石内基质蛋白在泌尿系结石形成中的作用与机制提供依据。方法:通过随机收集临床结石样本20例,通过清洗、干燥、充分碾磨结石标本后,采用结石成分分析仪分析结石无机组成成分;收集对应患者晨尿进行尿液分析及细菌培养。取准备好的结石样本粉末1克,加入5毫升RIPA蛋白裂解液溶解结石内蛋白,经冷冻干燥技术,浓缩提取结石内蛋白;采用Qproteome Bacterial Protein Prep K it试剂盒提取大肠杆菌蛋白。应用Bradford法分别测定草酸钙结石和大肠埃希氏菌内蛋白浓度,再通过SDS-SPAGE电泳纯化蛋白,银染染色和考马斯亮蓝染色分别鉴定结石和大肠杆菌内蛋白分子量大小,最后进行蛋白对比。通过胶内酶解后抽提肽段,经质谱分析鉴定蛋白质成份,对质谱结果进行Gene Ontology等生物功能信息分析。结果:1、草酸钙结石平均蛋白浓度为0.57ug/uL。存在泌尿道感染时的草酸钙结石内蛋白含量相对较高(p<0.05)。大肠杆菌蛋白浓度为5.38ug/uL。2、草酸钙结石蛋白与大肠杆菌的蛋白条带比对:SDS-PAGE结果显示草酸钙结石提取的蛋白至少能形成3至4条蛋白带,主要集中在25.0-35.0KDa和66.2-116.0KDa;大肠杆菌的蛋白条带主要集中在35.0KDa-116.0KDa。蛋白条带图谱提示草酸钙结石与大肠杆菌内蛋白质成份具有重叠性。3、草酸钙结石蛋白成分:蛋白质谱分析显示草酸钙结石内含有88种蛋白成分,以结合功能蛋白为主;其中包括S100蛋白家族、fibronectin、角蛋白等炎症相关蛋白。结论:泌尿系草酸钙结石内蛋白成分复杂,不仅与大肠杆菌蛋白成分存在交叉,而且存在炎症相关蛋白,提示草酸钙结石形成与尿路感染存在关联,而结石内感染相关性蛋白成分在结石形成过程中所扮演的角色有待深入研究。
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