【摘 要】
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目的采用RNA干扰(RNAi)技术沉默转化生长因子基因(TGF-β1),观察RNAi的基因沉默效应及对人膀胱癌细胞株(EJ细胞)中血管内皮生长因子基因(VEGF)表达的影响,探讨TGF-β1对VEGF
【机 构】
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四川省医学科学院·四川省人民医院泌尿外科;
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目的采用RNA干扰(RNAi)技术沉默转化生长因子基因(TGF-β1),观察RNAi的基因沉默效应及对人膀胱癌细胞株(EJ细胞)中血管内皮生长因子基因(VEGF)表达的影响,探讨TGF-β1对VEGF在膀胱肿瘤血管生成中的调节作用。方法构建基因TGF-β1特异性siRNA表达载体,Real time-PCR及ELISA筛选出抑制效率最高的靶序列,分成EJ细胞组、对照组(TGF-β1组)、重组质粒组(TGF-β1siRNA表达载体组),转染EJ细胞后,Real time-PCR检测VEGF mRNA的水平。结果成功构建基因TGF-β1特异性siRNA表达载体,Real time-PCR及ELISA筛选出最佳抑制效果的序列〔TGF-β1mRNA表达水平为0.92±0.19;其细胞培养上清液中TGF-β1蛋白表达水平为(50.08±5.85)pg/mL〕转染后,各组的VEGF mRNA表达水平以重组质粒组最低(P<0.05);VEGF mRNA的表达随TGF-β1基因沉默而减少(P<0.05)。结论抑制TGF-β1基因能下调VEGF基因的表达,TGF-β1基因可能通过诱导VEGF基因的表达实现对膀胱肿瘤血管生成的调控。
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