龙牙楤木皂苷的制备及降血脂功能的研究

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龙牙榴木(Aralia elata)是五加科锪木属的多年生木本植物,含有丰富的皂苷、多酚、多糖等生物活性成分,对于治疗急慢性炎症、神经衰弱、心肌缺血、高血脂、糖尿病及抗肿瘤方面有显著疗效。现代药理学研究及临床试验证明皂苷类化合物是龙牙锪木的主要功能性组分,因此本论文以龙牙锪木为试验原料,对比分析不同产地龙牙锪木营养成分、研究龙牙锪木皂苷类化合物的提取方法、纯化工艺及其降血脂功能,为龙牙楤木这一药食同源性木本植物更好的开发利用、更全面地发挥其药用价值和经济价值提供科学参考。研究的主要结论如下:(1)以丹东、白山、伊春、辽阳、本溪和通化地区的龙牙楤木为试验原料,测定其营养成分及活性物质的含量。结果表明不同产地龙牙楤木含水量80.52%~84.06%、粗脂肪含量0.51%~1.53%、粗蛋白含量2.30%~2.89%、粗灰分含量9.03%~10.56%、叶绿素含量 0.191~0.627mg/g、总糖含量 71.83~119.31mg/g、还原糖含量 18.24~38.20mg/g、多酚含量 33.57~44.66mg/g、黄酮含量 0.80~1.26mg/g、皂苷含量 27.55~34.83mg/g、Vc含量98.08~122.23μg/g。龙牙楤木含有丰富的钾、钙、钠、镁、磷等矿物元素,矿物元素含量24571.76~25110.25μg/g,综合考量丹东地区的龙牙锪木最具开发价值,因此选取丹东地区龙牙锪木作为下一步试验的原材料。(2)以龙牙锪木皂苷得率为指标,采用Box-Behnken响应面法分别优化三种提取方法的工艺条件,确定最佳提取工艺。真空耦合超声波法的最佳工艺条件为:料液比1:25.1g/mL、乙醇体积分数80%、超声温度57.7℃、超声功率273.9W、超声时间50min、真空度0.0784MPa,在此条件下皂苷得率为4.21%。盐析辅助酶法最佳工艺为:酶解pH5.405、酶解温度61.3℃、磷酸氢二钠添加量7.74%、酶解时间90min、纤维素酶添加量1.5%,在此条件下皂苷得率为3.97%。超声波辅助醇提法的最佳工艺条件为:料液比1:25g/mL、乙醇体积分数82.95%、超声温度82.62℃、超声功率270W、超声时间78.88min,在此条件下皂苷得率为3.87%。对比三种提取方法的皂苷得率从大到小为:真空耦合超声波法>盐析辅助酶提法>超声辅助醇提法。(3)通过静态试验分析吸附率和解吸率筛选10种大孔树脂,结果发现D101大孔树脂对龙牙锪木皂苷类化合物回收效果最好。研究D101树脂动态吸附与解吸试验确定最佳工艺条件为:以浓度为0.20mg/mL、pH为3的皂苷溶液上柱,用3BV的80%的乙醇溶液洗脱,洗脱流速控制为2.0BV/h,在此条件下,龙牙锪木皂苷类化合物纯度从8.06%提高到35.40%。采用硅胶柱对龙牙锪木皂苷树脂纯化物进一步纯化,通过薄层色谱法确定硅胶洗脱剂为氯仿:甲醇:水(3:1:0.1),经颜色反应和薄层色谱定性鉴定硅胶洗脱组分为龙牙锪木皂苷,且纯度提升至50.65%。(4)以体外胆酸盐结合能力和小鼠动物试验分析龙牙楤木皂苷降血脂功能,并研究龙牙锪木皂苷对小鼠肝脏中脂质代谢相关酶和抗氧化酶活性的影响,结果表明:龙牙锪木皂苷硅胶纯化物和树脂纯化物对胆酸盐具有较好的结合能力,其中龙牙橡木皂苷硅胶纯化物对甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、胆酸钠的结合能力依次为1.71μmol/l00mg、1.93μmol/100mg、0.91μmol/100mg。龙牙橡木皂苷能够抑制高脂小鼠体重的增加、改善肝脏脏器指数,显著(P<0.05)降低小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)以及动脉硬化指数(AI),升高高密度脂蛋白(HDL-C)水平,同时,龙牙锪木皂苷能显著(P<0.05)提高肝脂酶(HL)、脂蛋白脂酶(LPL)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)的活性,降低小鼠肝脏中丙二醛(MDA)含量。
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