牦牛皱胃全长转录组测序与胃溶菌酶突变表达及抑菌研究

来源 :西南民族大学 |
牦牛(Bos grunniens)是高寒地区特有牛种,长期以来为高原地区的牧民提供了食、住、行等有效生活保障和经济来源。牦牛皱胃作为新生牦牛唯一具有消化功能的真胃,不仅能分泌胃酸以消化食物中的蛋白质和脂肪,还能分泌具有抗
牦牛(Bos grunniens)是高寒地区特有牛种,长期以来为高原地区的牧民提供了食、住、行等有效生活保障和经济来源。牦牛皱胃作为新生牦牛唯一具有消化功能的真胃,不仅能分泌胃酸以消化食物中的蛋白质和脂肪,还能分泌具有抗酸、抗胃蛋白酶能力的溶菌酶。溶菌酶(lysozyme,LYZ)是动物机体中关键的先天免疫因子,具有杀菌、抗病毒、抗炎和免疫调节作用。本研究利用PacBio SMRT测序技术对牦牛皱胃全长转录组进行测序,获得了牦牛皱胃全长转录组数据。并对牦牛胃溶菌酶(yak stomach lysozyme 1a,ysLYZ1a)和氨基酸突变牦牛胃溶菌酶(mutant yak stomach lysozyme 1a,mysLYZ1a)进行真核表达与纯化。利用体外试验探究ysLYZ1a、mysLYZ1a对金黄色葡萄球菌、E.coli O111和肠沙门氏菌的抑制作用,利用体内试验探究ysLYZ1a、mysLYZ1a对小鼠E.coli O111腹泻的治疗效果。主要研究结果如下:1.利用PacBio Sequel平台测序获得了牦牛皱胃全长转录组数据,共获得14 467 420个子序列,过滤和去冗余后对比参考基因组最终获得8 556条非重复序列(Unigenes)。对转录组数据进行了NR、Swiss-Prot、KEGG、KOG、egg NOG、GO和Pfam七大数据库对比注释,分别注释到8 544、8 475、1 721、6 572、8 491、7 725、8 162条Unigenes。通过转录因子(transcription factor,TF)注释分析得到943个TFs,分布在51个TFs家族。CDS预测到8 544个基因片段可视为CDS编码区,共有82条注释到溶菌酶序列。SSR分析检索出3 596个SSR位点,可变剪切分析得到1 825个可变剪接事件。2.通过查阅文献资料,确定mysLYZ1a氨基酸突变位点:A18D、K43T、Q102S。利用人工合成的方法构建ysLYZ1a和mysLYZ1a基因的真核表达载体p PICZαA-ysLYZ1a、p PICZαA-mysLYZ1a,化学法转化至毕赤酵母X33菌株。诱导表达并纯化后ysLYZ1a比酶活为1 424.17 U/mg,mysLYZ1a比酶活为2 649.28U/mg。结果表明mysLYZ1a比酶活比ysLYZ1a比酶活提高了1 225.11 U/mg。3.通过体外抑菌试验,表明ysLYZ1a和mysLYZ1a对3种试验菌的抑菌效果由强到弱是:金黄色葡萄球菌>肠沙门氏菌>E.coli O111。在体内模型试验中,通过腹腔注射E.coli O111建立小鼠腹泻模型,使用抗生素、ysLYZ1a和mysLYZ1a分别对腹泻小鼠进行治疗,并与正常组、感染组比较。与正常组相比,感染组小鼠体重明显下降,白细胞数目显著增多,肺脏、脾脏指数显著增高(P<0.05),十二指肠损伤严重,而经抗生素、ysLYZ1a、mysLYZ1a治疗后各组指标较感染组均有所改善。通过对各组小鼠肠道菌群α多样性和β多样性分析,结果显示,E.coli O111感染会显著降低肠道菌群多样性和丰富度(P<0.05)。感染组肠道菌群变形菌门、厚壁菌门相对丰度显著增加,而拟杆菌门显著减少;mysLYZ1a、抗生素治疗后拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门的比例基本恢复正常,弯曲杆菌少量增多;而ysLYZ1a治疗后变形菌门仍有所增多。mysLYZ1a、抗生素可通过增加肠道有益菌丰度和降低有害菌丰度来恢复菌群结构,ysLYZ1a组还存在少量大肠杆菌,有害菌增加,少量有益菌增加,ysLYZ1a组治疗效果较mysLYZ1a组和抗生素组差。
第二课堂是第一课堂的重要补充和延伸,是学校人才培养的重要组成部分。在以学生为中心、以第一课堂为基础、以预期成果为导向教育理念的指导下,第二课堂要细致、全面地优化带
目的:通过钼靶X线、免疫组化染色观察,探讨乳腺癌的VEGF、C-erbB-2表达与钼靶X线征象之间的关联性。方法:选取我院经过乳腺钼靶X线片诊断和临床病理证实、资料完整的乳腺癌病例
高校课堂教学前期发生的教学准备活动对学生后续学习成效会产生影响。运用前馈式策略的课程教学法将课堂教学知识的消化吸收转移至课前课后完成,课堂成为教师和学生互动交流
<正>目的:探讨彩超引导经阴道穿刺活检卵巢占位病变的临床应用价值。方法:研究对象为我院05 年3月~06年6月间11例经各种化验检查或影像检查难以确诊的卵巢占位患者,均为已婚妇
会议
我科自1957-1930年收治的皮肌炎55例,男21例、女34例,年龄5-63岁,4例为儿童.8例合并恶性肿瘤,其中鼻咽癌3例、肺癌3例、胃癌1例、乳腺癌1例.1例并有自身免疫性溶血性贫血.19例作了随访.死亡串为15%(8/55)死因为心力衰竭、肺炎、败血症、肿瘤.尿肌酸反复检查为重要诊断手段.多数病人需用皮质激素二年以上.
期刊
为深入研究CDIO(Conceive-Design-Implement-Operate)工程教育理念在体育教育领域所发挥的作用,探讨CDIO理念下的体育教学模式对大学生身心健康产生的影响,采用文献资料法,构
摘 要 目的:研究国产血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂替罗非班(欣维宁)在治疗急性心肌梗死(AMI)患者急诊经皮冠状动脉介入(PCI)术后的疗效和安全性。结果:30天主要不良事件发生率4.9%,术后即刻IRA的IMI3级血流获得率95%,严重出血发生率0%, 轻微出血发生率7.4%。结论:替罗非班在急性心肌梗死的标准治疗基础上能进一步减少心肌缺血事件,改善PCI术后的冠脉血流,同时又具有较好的安
期刊
近年来,伴随着经济社会的飞速发展和科学技术的巨大进步,破坏人类赖以生存的环境问题也在频频发生。21世纪,作为一个倡导循环经济和绿色环保的新世纪,企业的目标已不仅仅是追求
日前,国内电商智能导购APP“花生日记”因涉嫌传销,受到了广州市工商局行政处罚,罚款150万元,没收违法所得7306万元,共计7456万元。  这是我国社交电商领域的第二笔巨额罚单。2017年,社交电商“云集微店”因以“交入门费”、“拉人头”和“团队计酬”的行为开展运营,涉嫌传销,被市场监管部门罚款958.4万元。  不管是此前的“云集微店”,还是现在的“花生日记”,其营销模式与传统传销如出一辙,
期刊
二十一世纪是一个信息日新月异的时代,二十一世纪培养的人才,不仅要掌握扎实的基础知识和技能,更重要的是必须具备较强的主体意识、合作意识、竞争意识和创新意识,以及较强的动手能力、创造能力和社会适应能力等。这种跨世纪人才素质的培养需求,促使我们反思以往所进行的英语教学存在着很大的局限性:重理论、轻实践;重书本知识的传授,轻动手能力的培养;重学习结果,轻学习过程;重间接知识的学习,轻直接经验的获得;重教师
期刊
系统性硬皮病(SSc)是一种全身性结缔组织病, 以皮肤和某些内脏器官中胶原的过度聚集为特征。胶原是真皮的主要成分之一, 它主要由成纤维细胞产生, 其合成是组织再生、纤维化的重要步骤。目前已知某些细胞因子, 如转化生长因子-β, 白介素-1, γ-干扰素及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对胶原的代谢有特殊的作用。其中, 由巨噬细胞合成的TNF-α在胶原的代谢中发挥最重要的调节作用。
菱角是我国著名特产之一,嫩果可作水果食用。该文介绍采用鲜菱角春提早栽培提前上市、秋延后管理延迟采收的设施栽培技术,包括品种选择、播种、移栽、田间管理、病虫害防治、鲜
本文从女性主义的翻译理论观出发,探讨了女性主义翻译思想的起源及其对翻译、译者和译者风格地位的影响,认为女性主义翻译理论肯定了译者风格的存在,并从三方面对译者风格进
中国故事的题材很广泛、内容众多。要在众多故事中选好故事、讲好故事,就必须遵循新闻的传播规律、讲究传播艺术,让受众想听并听懂。本文围绕中国国际广播电台塞尔维亚语广播
朱建贵教授任职于中国中医科学院广安门医院老年病科,从事临床工作40余年,深入研究《内经》、《伤寒论》等中医典籍,擅长经方时方化裁治疗各种内科杂病,尤其在方药治疗老年性
<正>我们说,我国的基本医疗保险是社会医疗保险制度模式。我们也说,我国在医疗保障制度建设中学习借鉴了德国医疗保险制度的政策和管理框架。对于社会医疗保险制度的特点,专
本文从三权分置的视野下分别阐述了承包权与经营权,而后对分离出来的经营权的实现路径提出了建议,实现三权分置有利于明晰土地产权关系,实施精准扶贫、精准脱贫,推动现代农业
《陶瓷》杂志主要内容包括建筑卫生陶瓷、工业陶瓷、日用陶瓷、电子陶瓷及陶瓷机械等无机非金属材料工业的新技术、新工艺、新产品、新设备等的研制和应用,辟有"专家论坛"、"
财务工作是高校所有工作的重要基础,是高校各部门开展工作、提升工作效能的重要保障,是高校稳定高效发展的关键。财务人员是高校财务管理的主体,是财务管理的直接责任人。从
目的研究甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(methyl methanesulfonate and UV sensitive gene clone 81,Mus81)沉默对Hep3B人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法采用慢病毒介导
受国外学校评价中"代币制"的启发,推行《郯城三中七彩阳光多元评价实施细则》,评价范围涵括学生素质发展的"德、智、体、美、劳"以及学生的"人文、科学、艺术、实践、健康"等多方面
由于我国慈善信托税收优惠制度理论研究的薄弱以及立法的不完善,当前慈善信托的税收优惠主要比照公益事业捐赠的税收优惠进行调整,这导致实务中在对慈善信托提供税收优惠时存