人朊蛋白不同N-糖基化修饰突变体的构建及其在哺乳动物细胞中表达

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：wgqlogin

【摘要】

：

构建并表达人朊蛋白N-糖基化修饰位点突变的真核表达载体，有助于进一步研究朊蛋白N-糖基化修饰的生物学功能。定点突变野生型人朊蛋白基因PRNP，将获得的突变体亚克隆至真核表达

【作者】

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杨洋陈岚韩兵社许彩民潘华珍

【机构】

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中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

【出处】

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生物工程学报

【发表日期】

：

2006年3期

【关键词】

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朊蛋白 N-糖基化修饰糖蛋白 pfion protein N-glycosylation HeLa cells

【基金项目】

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国家自然科学基金重点项目资助（No：30130070）.

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构建并表达人朊蛋白N-糖基化修饰位点突变的真核表达载体，有助于进一步研究朊蛋白N-糖基化修饰的生物学功能。定点突变野生型人朊蛋白基因PRNP，将获得的突变体亚克隆至真核表达载体pcDNA3．1中，并在人宫颈癌细胞株HeLa中瞬时表达各种朊蛋白糖基化修饰位点突变体，利用免疫印迹和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鉴定表达产物的糖基化形式。经Westernblot鉴定，野生型和突变型朊蛋白表达产物出现不同形式的泳动特征，分别出现特异性糖基化修饰的多个条带，单糖基化修饰的两条条带和无糖基化修饰的一条条带。经PNGase

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