【摘 要】
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参照大肠埃希菌密码子的偏好性,对GenBank中发布的鸭γ-干扰素基因序列进行密码子优化,人工合成后连接至原核表达载体pET-30a-ELP;将重组表达质粒pET-30a-DuIFNγ-ELP转化到
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 南京师范大学生命科学学院;
【基金项目】
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江苏省高校自然科学研究重大项目(19KJA520008);江苏省现代农业产业技术体系专项[CX(19)3005];江苏省农业科技自主创新资金重大项目[CX(18)1004];江苏省现代产业体系建设专项(JATS[2018]238)
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参照大肠埃希菌密码子的偏好性,对GenBank中发布的鸭γ-干扰素基因序列进行密码子优化,人工合成后连接至原核表达载体pET-30a-ELP;将重组表达质粒pET-30a-DuIFNγ-ELP转化到大肠埃希菌BL21 (DE3)中, IPTG诱导表达制备DuIFNγ-ELP;通过SDS-PAGE切胶方法得到纯化的DuIFNγ-ELP;纯化产物免疫小鼠后收获血清,用Western blot验证免疫血清的特异性,并用ELISA法检测其特异性抗体滴度。结果表明:重组鸭γ-干扰素基因能成功表达,重组蛋白大小约为78 ku;纯化的目的蛋白纯度约为90%,能诱导小鼠产生特异性抗体,效价为1∶15 000。这一研究为研制广谱、安全、高效的基因工程鸭γ-干扰素及检测体内外DuIFN-γ的表达奠定了基础。
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