论文部分内容阅读
摘要：目的建立H PLC法测定养血颗粒中阿魏酸的含量。方法采用C18（5 μm，4.6×250 mm）为色谱柱，以乙腈-1%冰醋酸（20：80）为流动相，检测波长为322 nm，流速为1.0 mL/min。结果阿魏酸在11～55 μg/mL范围内呈现良好的线性关系，r=0.9997，平均加样回收率为99.15%，RSD=1.16%。结论本法简便、准确，重现性好，可作为养血颗粒的质量控制方法。
关键词：养血颗粒；HPLC；阿魏酸
中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）11-0074-02
养血颗粒为临床经验方，由当归、桃仁、太子参、玄参等l0味中药组成的复方中药制剂，具有滋阴清热、养阴安神的功效，临床上广泛用于入睡困难，多梦易醒，醒后不眠等失眠症。方中当归为主药，具有降气止咳平喘，润肠通便的功效[1]，阿魏酸是当归的主要活性成分之一，具有多方面的生物活性[2]，当归生药及其制剂常选用阿魏酸的含量作为其质量控制指标，因此，为了有效控制养血颗粒质量，保证养血颗粒的临床疗效，本研究中以方中主药当归的有效成分阿魏酸作为指标成分，采用高效液相色谱（HPLC）法直接测定阿魏酸的含量，该方法专属性强、简便准确、重复性好，现将结果报道如下。
1仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（四元泵，DAD检测器，自动进样器），Agilent1200工作站；BP211D型电子分析天平（德国Sartoius）。阿魏酸对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611）；养血颗粒（系自制）；水为超纯水，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2方法
2.1色谱条件色谱柱：Agilent C18柱（250 mm x 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-1%冰醋酸（22-80）；流速：1.0 mL/min；柱温：3 0℃；检测波长：322 nm；进样量10 μL。在此条件下，阿魏酸与其他色谱峰分离良好，理论板数以阿魏酸计算，应不低于3000.
2.2对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，精密称取阿魏酸2.215 mg，置1000 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（2.2 μg/mL）.
2.3供试品溶液的制备取养血颗粒剂适量，研细，取2 g，精密称定，加水10 mL，搅拌，完全溶解，加乙酸乙酯振摇，萃取4次，每次 15 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置水浴蒸干，残渣加70%甲醇溶解，并转移至10 mL量瓶中，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液[3-4]。
2.4阴性对照试验按处方取缺当归的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与阿魏酸相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰阿魏酸的测定。
2.5线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25 μL进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，阿魏酸的回归方程为Y=632.7X+6.85，r=0.9997，表明进样量在11～55 μg/mL范围内，线性关系良好。
2.6精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样6次，测定阿魏酸峰面积值，计算阿魏酸RSD为0.98%，结果表明精密度良好。
2.7稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定，记录阿魏酸峰面积，结果RSD为1.34%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8重复性实验精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定阿魏酸的含量，计算阿魏酸RSD为1.45%，表明本方法重复性良好。
2.9加样回收率实验采用加样回收法测定，取已知含量的样品（批号：140311）研细，取约1.0 g，精密称定，精密加入阿魏酸对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
3讨论
当归药材中阿魏酸的法定测定方法是用70%的甲醇，加热回流提取，以乙腈-0.085%磷酸为流动相[5]，本研究中，采用乙酸乙酯萃取来提取阿魏酸，采用的流动相是乙腈-1%冰醋酸（20：80），在此色谱条件下，可使阿魏酸分离良好，峰形较好，理论板数高。对于测定波长的选定，我们通过用紫外分光光度计进行扫描，对照品和供试品的甲醇溶液均在322 nm波长处有最大吸收，故选择322 nm为检测波长[4]。试验中采用曾考察了乙酸乙酯萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，结果表明，萃取4次，与乙酸乙酯萃取5次，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择乙酸乙酯萃取4次，同时对乙酸乙酯每次萃取用量做了比较，分别每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，结果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故选择乙酸乙酯萃取，每次15 mL。参考文献：
[1]尹辉.当归化学成分及药理活性研究进展[J].重庆科技学院学报（自然科学版），2015，17（1）：100-103.
[2]刘如秀，刘宇，汪艳丽，等.当归的药理作用[J].西部中医药，2014，27（11）：153-156.
[3]刘雪松.活血止痛颗粒剂中阿魏酸的含量测定[J].民营科技，2 014，11：67.
[4]宋兴发，刘俊超.HPLC法测定复方调经糖浆中阿魏酸的含量[J].海峡药学，2014，26（10）：63-64.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，124.
关键词：养血颗粒；HPLC；阿魏酸
中图分类号：R284文献标志码：A文章编号：1007-2349（2016）11-0074-02
养血颗粒为临床经验方，由当归、桃仁、太子参、玄参等l0味中药组成的复方中药制剂，具有滋阴清热、养阴安神的功效，临床上广泛用于入睡困难，多梦易醒，醒后不眠等失眠症。方中当归为主药，具有降气止咳平喘，润肠通便的功效[1]，阿魏酸是当归的主要活性成分之一，具有多方面的生物活性[2]，当归生药及其制剂常选用阿魏酸的含量作为其质量控制指标，因此，为了有效控制养血颗粒质量，保证养血颗粒的临床疗效，本研究中以方中主药当归的有效成分阿魏酸作为指标成分，采用高效液相色谱（HPLC）法直接测定阿魏酸的含量，该方法专属性强、简便准确、重复性好，现将结果报道如下。
1仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（四元泵，DAD检测器，自动进样器），Agilent1200工作站；BP211D型电子分析天平（德国Sartoius）。阿魏酸对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611）；养血颗粒（系自制）；水为超纯水，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2方法
2.1色谱条件色谱柱：Agilent C18柱（250 mm x 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-1%冰醋酸（22-80）；流速：1.0 mL/min；柱温：3 0℃；检测波长：322 nm；进样量10 μL。在此条件下，阿魏酸与其他色谱峰分离良好，理论板数以阿魏酸计算，应不低于3000.
2.2对照品溶液的制备取阿魏酸对照品，精密称取阿魏酸2.215 mg，置1000 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（2.2 μg/mL）.
2.3供试品溶液的制备取养血颗粒剂适量，研细，取2 g，精密称定，加水10 mL，搅拌，完全溶解，加乙酸乙酯振摇，萃取4次，每次 15 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置水浴蒸干，残渣加70%甲醇溶解，并转移至10 mL量瓶中，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液[3-4]。
2.4阴性对照试验按处方取缺当归的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与阿魏酸相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰阿魏酸的测定。
2.5线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25 μL进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，阿魏酸的回归方程为Y=632.7X+6.85，r=0.9997，表明进样量在11～55 μg/mL范围内，线性关系良好。
2.6精密度实验精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样6次，测定阿魏酸峰面积值，计算阿魏酸RSD为0.98%，结果表明精密度良好。
2.7稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定，记录阿魏酸峰面积，结果RSD为1.34%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8重复性实验精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定阿魏酸的含量，计算阿魏酸RSD为1.45%，表明本方法重复性良好。
2.9加样回收率实验采用加样回收法测定，取已知含量的样品（批号：140311）研细，取约1.0 g，精密称定，精密加入阿魏酸对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
3讨论
当归药材中阿魏酸的法定测定方法是用70%的甲醇，加热回流提取，以乙腈-0.085%磷酸为流动相[5]，本研究中，采用乙酸乙酯萃取来提取阿魏酸，采用的流动相是乙腈-1%冰醋酸（20：80），在此色谱条件下，可使阿魏酸分离良好，峰形较好，理论板数高。对于测定波长的选定，我们通过用紫外分光光度计进行扫描，对照品和供试品的甲醇溶液均在322 nm波长处有最大吸收，故选择322 nm为检测波长[4]。试验中采用曾考察了乙酸乙酯萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，结果表明，萃取4次，与乙酸乙酯萃取5次，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择乙酸乙酯萃取4次，同时对乙酸乙酯每次萃取用量做了比较，分别每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，结果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故选择乙酸乙酯萃取，每次15 mL。参考文献：
[1]尹辉.当归化学成分及药理活性研究进展[J].重庆科技学院学报（自然科学版），2015，17（1）：100-103.
[2]刘如秀，刘宇，汪艳丽，等.当归的药理作用[J].西部中医药，2014，27（11）：153-156.
[3]刘雪松.活血止痛颗粒剂中阿魏酸的含量测定[J].民营科技，2 014，11：67.
[4]宋兴发，刘俊超.HPLC法测定复方调经糖浆中阿魏酸的含量[J].海峡药学，2014，26（10）：63-64.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，124.