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摘 要：利用西瓜花叶病毒2号(WMV-2)外壳蛋白(CP)基因、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)复制酶(NIb)基因和黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因构建三价基因的植物表达载体，通过农杆菌介导转化四倍体西瓜植株，经分子检测证明目的基因成功地导人西瓜植株，并在后代中稳定遗传。经温室及大田接种鉴定，T3代转基因西瓜抗病毒性达中抗水平，为抗病毒无籽西瓜新品种的培育提供了可能性。
关键词：四倍体西瓜；病毒病；转基因；抗病性
病毒病是西瓜三大主要病害之一，在世界范围内均有发生。我国所有的西瓜种植区域均不能幸免，常年发病面积达10万hm2，年经济损失达1.5亿元。尤其在安徽、河南、河北、山东、山西、陕西等我国西瓜主产省区，病毒病的发生最为严重，且三倍体无籽西瓜病毒病的发生重于二倍体西瓜，目前尚无农药能有效地进行防治，不少田块因病毒病而绝收。因此，培育抗病毒病无籽西瓜新品种，是西瓜生产中亟待解决的问题。
1991—1997年，黄学森研究小组将WMV-2的CP基因导入西瓜植株，获得抗性材料，并获农业部批准，进行安全释放试验。2002年，王慧中等将WMV-2的CP转入西瓜，获得了抗WMV -2的纯合系。西瓜在大田遭受多种病毒的侵害，其中主要有3种病毒：WMV-2，ZYMV，CMV。抗1种病毒的转基因抗病材料不适合直接在生产中应用。美国As-grow种子公司，采用转基因技术，曾将WMV-2、CMv、ZYMv这3种病毒的CP基因成功转入西葫芦植株，获得了抗病毒病西葫芦新品种，并已获准上市。根据CP和复制酶基因介导的抗性特点，1998年以来，笔者将WMV-2CP基因、ZYMV复制酶基因、CMv复制酶基因构建成植物表达载体，通过农杆菌介导遗传转化二倍体西瓜植株。经分子检测和抗病毒鉴定，筛选获得的转基因西瓜株系表现出较好的抗病性能,随后笔者将三价外源基因转入四倍体西瓜，也获得了抗性植株。
1 材料与方法
1．1 材料
细菌菌株、质粒、寡核苷酸引物、植物表达载体的构建，与笔者培育转基因抗病毒病二倍体西瓜相同。植物表达载体的构建策略图见图1：
2．3 外源基因的Dot-blot和Southern-blot检测
在PCR检测基础上，用WMV-2CP基因为探针，进行了点杂交检测，同时选取内源单拷贝基因(丝氨酸乙酰转移酶)作上样内参照(图3)。从图3可看出，用sat探针进行杂交，结果表明样品之间总
关键词：四倍体西瓜；病毒病；转基因；抗病性
病毒病是西瓜三大主要病害之一，在世界范围内均有发生。我国所有的西瓜种植区域均不能幸免，常年发病面积达10万hm2，年经济损失达1.5亿元。尤其在安徽、河南、河北、山东、山西、陕西等我国西瓜主产省区，病毒病的发生最为严重，且三倍体无籽西瓜病毒病的发生重于二倍体西瓜，目前尚无农药能有效地进行防治，不少田块因病毒病而绝收。因此，培育抗病毒病无籽西瓜新品种，是西瓜生产中亟待解决的问题。
1991—1997年，黄学森研究小组将WMV-2的CP基因导入西瓜植株，获得抗性材料，并获农业部批准，进行安全释放试验。2002年，王慧中等将WMV-2的CP转入西瓜，获得了抗WMV -2的纯合系。西瓜在大田遭受多种病毒的侵害，其中主要有3种病毒：WMV-2，ZYMV，CMV。抗1种病毒的转基因抗病材料不适合直接在生产中应用。美国As-grow种子公司，采用转基因技术，曾将WMV-2、CMv、ZYMv这3种病毒的CP基因成功转入西葫芦植株，获得了抗病毒病西葫芦新品种，并已获准上市。根据CP和复制酶基因介导的抗性特点，1998年以来，笔者将WMV-2CP基因、ZYMV复制酶基因、CMv复制酶基因构建成植物表达载体，通过农杆菌介导遗传转化二倍体西瓜植株。经分子检测和抗病毒鉴定，筛选获得的转基因西瓜株系表现出较好的抗病性能,随后笔者将三价外源基因转入四倍体西瓜，也获得了抗性植株。
1 材料与方法
1．1 材料
细菌菌株、质粒、寡核苷酸引物、植物表达载体的构建，与笔者培育转基因抗病毒病二倍体西瓜相同。植物表达载体的构建策略图见图1：
2．3 外源基因的Dot-blot和Southern-blot检测
在PCR检测基础上，用WMV-2CP基因为探针，进行了点杂交检测，同时选取内源单拷贝基因(丝氨酸乙酰转移酶)作上样内参照(图3)。从图3可看出，用sat探针进行杂交，结果表明样品之间总