目的探索高效制备富血小板血浆(PRP)的方法,并观察不同体积分数的PRP对Beagle犬脂肪干细胞(ADSC)体外增殖及其向成骨细胞分化的影响。方法抽取3只Beagle犬静脉血各40 mL,分别用传统的二次离心法和改良的三次离心法制备PRP,进行血小板计数分析。分别将体积分数为5%、10%、15%、20%的PRP加于Beagle犬ADSC的培养液中,于作用后48、72、96 h检测细胞的增殖状况;将ADSC分别培养在添加了体积分数为5%、10%、15%、20%的PRP和不加PRP的成骨细胞诱导液中,观察ADSC的成骨表达以及PRP对其成骨矿化的影响。结果三次离心法制备的PRP中血小板的含量明显高于二次法制备的。各组PRP促ADSC增殖作用均显著强于阴性对照组(P<0.001);不同体积分数PRP组间差异有统计学意义(P<0.001),细胞增殖在体积分数15%PRP组、96 h时达到峰值。von Kossa染色中矿化结节数量随着浓度上升而增多,体积分数20%PRP组最多。结论三次离心法制备PRP的效率高于二次离心法。PRP对Beagle犬ADSC的体外增殖有促进作用,与PRP体积分数和作用时间呈正相关关系。ADSC矿化结节的数量与PRP的体积分数呈正相关关系。