【摘 要】
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目的 探讨瑞香素通过抑制硫氧还蛋白结合蛋白（Thioredoxin-interacting protein, TXNIP）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3）信号通路来对氧糖剥夺/复氧（Oxygen-glucose deprivation/Reoxyge
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目的 探讨瑞香素通过抑制硫氧还蛋白结合蛋白（Thioredoxin-interacting protein, TXNIP）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3）信号通路来对氧糖剥夺/复氧（Oxygen-glucose deprivation/Reoxygenation, OOGD/R）诱导的海马神经元炎症反应和凋亡的影响。方法 对体外培养的小鼠海马神经元HT-22做OGD/R处理诱导建立细胞损伤模型，采用细胞计数试剂盒-8（Cell counting Kit-8,CCK-8）实验检测0、5、10、20、40、80μmol/L的瑞香素对其细胞活力的影响，筛选出最佳作用水平；将体外培养的HT-22细胞随机分为对照组、模型组、瑞香素（40μmol/L）组、TXNIP空载（转染TXNIP空载质粒）组、TXNIP过表达（转染TXNIP过表达质粒）组、瑞香素（40μmol/L）+TXNIP过表达组，以瑞香素和质粒提前处理12 h后进行OGD/R诱导建立细胞损伤模型；采用二苯甲亚胺、三氯化氢2′-（4-羟基苯基）-5-（4-甲基-1-哌嗪基）-2,5′-二-1H-苯并咪唑（2′-（4-Hydroxyphenyl）-5-（4-methyl-1-piperazinyl）-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride, Hoechst）33258染色及流式细胞实验检测各组HT-22细胞凋亡情况；采用试剂盒检测各组HT-22细胞线粒体膜电位；应用酶标仪测量各组HT-22细胞肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素（Interleukin, IL）-6、IL-1β、IL-18、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）、过氧化氢酶（Catalase, CAT）、活性氧（Reactive oxygen species, ROS）及乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase, LDH）释放水平；采用免疫印迹实验检测各组HT-22细胞TXNIP/NLRP3通路蛋白表达水平。结果 选择40μmol/L瑞香素处理OGD/R诱导HT-22细胞进行后续实验；与对照组比较，模型组HT-22细胞凋亡率、细胞TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-18及ROS水平、细胞LDH释放水平、细胞TXNIP,NLRP3及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（Cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1）蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）,线粒体膜电位、细胞SOD及CAT水平明显降低（P＜0.05）。分别与模型组、瑞香素+TXNIP过表达组比较，瑞香素组HT-22细胞凋亡率、细胞TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-18及ROS水平、细胞LDH释放水平、细胞TXNIP,NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平均降低（P＜0.05）,线粒体膜电位、细胞SOD及CAT水平均升高（P＜0.05）;TXNIP过表达组HT-22细胞凋亡率、细胞TNF-α,IL-6,IL-1β,IL-18及ROS水平、细胞LDH释放水平、细胞TXNIP,NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平均升高（P＜0.05）,线粒体膜电位、细胞SOD及CAT水平均降低（P＜0.05）;TXNIP空载组HT-22细胞各指标水平均无明显变化（P＞0.05）。结论 瑞香素可通过抑制TXNIP/NLRP3信号通路来降低OGD/R诱导的ROS和炎性因子过量表达，抑制炎症和氧化应激反应，缓解海马神经元线粒体损伤，减轻神经元凋亡。
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