【摘 要】
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费氏中华根瘤菌可以利用脯氨酸作为惟一碳、氮源生长. 利用转座子Tn5gusA5随机插入诱变的方法得到6000多株突变子, 并从中筛选到1株脯氨酸分解代谢缺陷的突变子GXHN100. 通过
【机 构】
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广西大学生命科学与技术学院,广西亚热带生物资源保护利用重点实验室,广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
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费氏中华根瘤菌可以利用脯氨酸作为惟一碳、氮源生长. 利用转座子Tn5gusA5随机插入诱变的方法得到6000多株突变子, 并从中筛选到1株脯氨酸分解代谢缺陷的突变子GXHN100. 通过插入位点的定位及序列分析, 发现插入位点位于一个未确定功能的ORF内, 将该ORF命名为pmrA(proline metabolic relative). 通过原位杂交, 从构建的部分基因文库中获得1个阳性克隆pGXHN100(含有3.3 kb外源片段), 序列分析表明它包含了插入基因的完整序列. 将3.3 kb的pGXHN100外源片段连接到广宿主载体pLAFR3上获得重组质粒pGXHN200, 通过三亲接合, 将pGXHN200导入GXHN100获得互补菌株GXHN200. 植株实验发现, 突变体GXHN100结有效瘤, 固氮酶活与出发菌株无显著差异, 但结瘤时间延迟, 结瘤效率及竞争结瘤能力下降, 而互补菌株GXHN200与野生型HN01没有明显的差异.
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