【摘 要】
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目的:运用RNA干扰技术,建立稳定表达siCaSR的Caco-2细胞株。方法:构建靶向CaSR基因的RNA干扰表达载体,采用脂质体转染至Caco-2细胞株上。通过嘌呤霉素培养筛选稳定转染siCaSR
【机 构】
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东莞市第三人民医院药学部,广东医科大学东莞校区科研平台,东莞市第三人民医院检验科
【基金项目】
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东莞市社会科技发展项目(2016108101021);广东省中医药局科研项目(20181270)
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目的:运用RNA干扰技术,建立稳定表达siCaSR的Caco-2细胞株。方法:构建靶向CaSR基因的RNA干扰表达载体,采用脂质体转染至Caco-2细胞株上。通过嘌呤霉素培养筛选稳定转染siCaSR的Caco-2细胞株。荧光显微镜下观察细胞的荧光表达情况,通过定量PCR和Western blot方法检测siCaSR细胞CaSR mRNA和蛋白的表达水平。结果:筛选siCaSR稳定表达细胞株嘌呤霉素筛选浓度为1μg/mL,所构建的质粒载体能显著抑制Caco-2细胞中CaSR的表达。转染siRNA后80%的C
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