人细胞核dUTPase的克隆表达及其酶学活性

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【摘要】

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以阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者脑cDNA文库质粒为模板,用PCR方法扩增得到人细胞核dUTP焦磷酸酶(dUTPase)的cDNA,将其克隆到谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达

【作者】

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陈巧林任宏伟康巧华王宗元茹炳根

【机构】

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北京大学人民医院,北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系,扬州大学畜牧兽医学院

【出处】

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中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

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2003年5期

【关键词】

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人细胞核 DUTPASE 克隆表达酶学活性 dUTP焦磷酸酶亲和层析 dUTP pyrophosphatase fusion protein affi

【基金项目】

：

国家科技攻关项目

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以阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者脑cDNA文库质粒为模板,用PCR方法扩增得到人细胞核dUTP焦磷酸酶(dUTPase)的cDNA,将其克隆到谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1中,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达.表达的融合蛋白GST-dUTPase经过谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析,凝血酶酶切和Sephacryl S-100纯化,得到高纯度dUTPase蛋白.通过SDS-PAGE,氨基酸组成分析,N端氨基酸序列测定以及HP

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