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我们通过获取血管平滑肌细胞原代并体外扩增,为组织工程血管化提供血管平滑肌细胞一、材料与方1.分离与培养:无菌条件下取家兔胸主动脉,翻转使内膜面朝外,结扎两端.利用Ⅰ型胶原酶溶液消化12h,获得血管平滑肌细胞原代悬液,用Lonza专用培养基培养,定期换液并传代培养2.鉴定:(1)电镜法:将培养的细胞制成细胞悬液,离心并制作电镜标本,透射电镜观察并摄片;(2)免疫荧光法鉴定:将细胞悬液接种于细胞爬片,培养状态良好即可固定制片,依次孵育α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)抗体、异硫氰酸荧光素(FlTC)标记的IgG抗体、4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI),抗荧光淬灭封片液封片.置于激光共聚焦显微镜下观察并摄片.