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目的
建立数字PCR(dPCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因T790M突变平台，并评估其基本性能和临床价值。
方法方法学建立。收集2014年1月至2015年10月于复旦大学附属中山医院就诊的10例经EGFR-TKI治疗后发生耐药的NSCLC患者。设计EGFR基因T790M突变及野生型的引物及特异性探针，建立dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，根据自配不同浓度标准品质粒验证该检测平台空白限、灵敏度和线性以建立最适报告和复检流程。采用dPCR和扩增受阻突变系统(ARMS)检测患者肺癌组织和血浆标本，卡方检验比较两种方法检测不同标本类型的EGFR基因T790M突变一致性，Pearson相关分析dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度的相关性。
结果dPCR检测平台空白限为10拷贝，功能灵敏度为0.01%，且在0.01%～100%范围内线性良好(Y＝1.226X－3.984，R2＝0.999)。dPCR和ARMS检测肺癌组织EGFR基因T790M突变一致性较高(kappa＝0.80)，而dPCR检测血浆突变阳性率高于ARMS(50% vs 20%，P<0.05)Pearson相关分析发现dPCR检测肺癌组织和血浆突变分子丰度高度相关(R＝0.923，P<0.05)。
结论建立了高灵敏、绝对定量的dPCR检测EGFR基因T790M突变平台，其联合血浆ctDNA能真正实现"液体活检"，对指导耐药后患者个体化治疗有重要价值。(中华检验医学杂志，2016, 39：170-175)