【摘 要】
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目的 急性肝功能衰竭是重要的临床综合征.近年来,对急性肝功能衰竭的治疗进展甚微,如何从根本上解决这一难题依然任重道远.方法 本研究基于pSilencer 4.1-CMV neosiRNA表达载
【机 构】
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第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心
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目的 急性肝功能衰竭是重要的临床综合征.近年来,对急性肝功能衰竭的治疗进展甚微,如何从根本上解决这一难题依然任重道远.方法 本研究基于pSilencer 4.1-CMV neosiRNA表达载体,设计并构建了TLR4 siRNA表达载体.经体外细胞转染实验,筛选了3条抑制效果较好的表达载体,进一步行体内动物实验.进行酶切及测序鉴定,体外评估其对转染RAW264.7细胞TLR4 mRNA、蛋白表达水平的抑制作用,进一步评价了TLR4 siRNA对TNF-α、MIP-2水平的影响,及对LPS诱导的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的作用;之后再采用3条抑制效率较高的TLR4 siRNA进行体内试验,采用尾静脉高压水注射法转染C57BL/6小鼠,静默TLR4的表达,再采用D-Ga lN/LPS联合诱导小鼠急性肝损伤,观察TLR4 siRNA对D-GalN/LPS诱导的肝损伤小鼠是否有保护作用,观察TNF-α、MIP-2水平的变化,观察肝细胞凋亡水平变化.结果 D-GalN/LPS联合给药前48 h及24 h TLR4 siRNA预处理可明显降低ALT及AST的升高幅度,TNF-α及MIP-2的mRNA及细胞因子水平亦被抑制,TUNEL阳性肝细胞百分率下降.TLR4siRNA预处理可明显减轻D-GalN/LPS对C57BL/6小鼠的肝损害作用,降低小鼠的死亡率.通过TLR4 siRNA阻断TLR4表达可能有助于控制LPS炎性反应,防治肝损伤.结论 通过本研究可望进一步阐明LPS/TLR4在急性肝衰竭发病机制中的作用,为今后从RNA角度治疗肝功能衰竭提供理论和实验依据.
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