研究吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞(AR42J细胞)凋亡的影响。
方法AR42J细胞分为空白对照组(常规培养)、吡格列酮组(40 μmol/L)、雨蛙肽组(1×10-8 mol/L)、吡格列酮＋雨蛙肽组(40 μmol/L吡格列酮＋1×10-8 mol/L雨蛙肽)、吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组(40 μmol/L吡格列酮＋5 μmol/L GW9662＋1×10-8 mol/L雨蛙肽)。吡格列酮、GW9662早于雨蛙肽30 min加入。在实验的3、6、12和24 h采用MTT法检测各组细胞的增殖率，采用异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率，脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡，检测各组半胱天冬酶(caspase)-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9的活性，采用JC-1染色流式细胞术检测细胞的线粒体膜电位。采用单因素方差分析和LSD检验分析数据。
结果作用6、12、24 h时吡格列酮组和吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的增殖活性分别为0.19±0.02、0.22±0.02、0.36±0.02和0.20±0.04、0.23±0.02、0.38±0.02，分别明显低于空白对照组(0.25±0.04、0.28±0.03、0.46±0.02，t＝–3.16、–4.61、–6.25)和雨蛙肽组(0.23±0.02、0.29±0.01、0.46±0.05，t＝–1.58、–4.61、–6.15，P均<0.05)，吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞增殖活性(0.23±0.02、0.27±0.02、0.45±0.01)高于吡格列酮＋雨蛙肽组(t＝2.25、3.87、4.56，P均<0.05)。作用6、12、24 h后，异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术发现吡格列酮组和吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的凋亡率分别为(11.80±0.47)%、(9.62±2.63)%、(14.92±2.52)%和(8.78±0.47)%、(11.89±2.80)%、(14.25±2.67)%，两组间差异均无统计学意义(P均>0.05)，但这两组分别明显高于空白对照组的(5.52±0.64)%、(5.30±0.97)%、(5.47±0.88)%和雨蛙肽组的(5.98±1.21)%、(7.47±0.58)%、(8.11±1.32)%，差异均有统计学意义(t对照组＝9.81、4.45、10.74，t雨蛙肽组＝4.38、7.62、6.98，P均<0.05)；吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞的凋亡率[(5.82±0.26)%、(6.05±0.83)%、(9.23±0.90)%]与雨蛙肽组无明显差异，与吡格列酮＋雨蛙肽组相比明显降低(t＝–4.63、–10.07、–5.70，P均<0.05)。作用12 h时TUNEL染色发现，吡格列酮组的凋亡率[(3.93±0.40)%]明显高于空白对照组[(2.73±0.68)%]，吡格列酮＋雨蛙肽组细胞凋亡率[(8.43±1.65)%]明显高于雨蛙肽组[(2.80±0.56)%]，吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞凋亡率[(3.87±0.35)%]低于吡格列酮＋雨蛙肽组(t＝7.93、8.92、–5.35，P均<0.05)。作用24 h时吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9活性(1.28±0.05、1.38±0.04、1.53±0.09)与雨蛙肽组(1.12±0.88、1.22±0.02、0.53±0.07)相比显著升高(t＝3.20、8.62、1.29，P均<0.05)，经GW9662干预后，半胱天冬酶类的活性部分恢复。吡格列酮组、吡格列酮＋雨蛙肽组线粒体膜电位改变细胞数目明显多于雨蛙肽处理组[(28.50±0.91)%、(28.20±2.56)%比(15.00±3.67)%，t＝8.10、10.02，P均<0.05]，而加入GW9662可使膜电位部分恢复[(20.67±2.20)%]。
结论吡格列酮可能通过激活半胱天冬酶的活性，改变细胞膜电位促进AR42J细胞的凋亡，而其拮抗剂GW9662能部分抑制吡格列酮的促凋亡功能。