【摘 要】
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旨在克隆鸡β-防御素Gal-9基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达,并对产物进行抑菌活性的检测。根据GenBank发表的鸡β-防御素基因Gal-9（NM001001611.2）设计引物,采用RT-PCR
【机 构】
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青岛农业大学动物科技学院; 青岛市畜牧兽医研究所; 青岛澳兰百特生物工程有限公司; 中国动物卫生与流行病学中心;
【基金项目】
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“十二五”农村领域国家高技术研究发展计划(863)项目(2012AA101303);山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队项目(SDAIT-13-011-03)
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旨在克隆鸡β-防御素Gal-9基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达,并对产物进行抑菌活性的检测。根据GenBank发表的鸡β-防御素基因Gal-9（NM001001611.2）设计引物,采用RT-PCR方法从鸡食道中扩增得到鸡β-防御素Gal-9基因,将该成熟肽基因克隆到原核表达载体pET-32a（+）的EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET-32a-Gal-9。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,于37℃进行诱导表达。结果扩增出Gal-9,其cDNA为204bp,成熟肽编码42个氨基酸。SDS-PAGE电泳表明,重组鸡Gal-9蛋白大小约为25ku,与预期大小一致,重组蛋白主要以包涵体形式存在。重组鸡Gal-9蛋白对金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、粪肠球菌（ATCC 29212）、大肠杆菌（ATCC 25922）、酵母菌（GS115）都能产生抑菌作用,最小抑菌浓度分别为62.50、31.75、125.00、31.75mg·L-1。成功获得了鸡β-防御素Gal-9成熟肽基因的表达产物,证实了重组鸡Gal-9蛋白具有广谱的抗菌活性,体外抑菌试验为其在家禽生产中应用提供了理论基础。
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