【摘 要】
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介绍一种称为CapFinder的技术,可用于克隆基因mRNA序列的5′末端非翻译区全长。该技术是利用某些反转录酶在反转录达到mRNA的5′末端帽结构时表现出很高的加尾活性(主要添加d
【基金项目】
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国家自然科学基金(30671369)资助项目
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介绍一种称为CapFinder的技术,可用于克隆基因mRNA序列的5′末端非翻译区全长。该技术是利用某些反转录酶在反转录达到mRNA的5′末端帽结构时表现出很高的加尾活性(主要添加dC)这一特点,在反转录体系中加入一种带GGG的寡核苷酸序列,当反转录反应到达mRNA模板的5′末端帽结构时,切换到以该寡核苷酸为模板继续进行反转录反应,即可合成完整的cDNA一链,且在其3′末端还带有一段额外的寡核苷酸序列。用GGG寡核苷酸序列为上游引物和基因特异性的下游引物进行PCR即可扩增得到mRNA5′末端非翻译区的全长。利用该技术克隆了棉铃虫幼虫中肠Bt毒素受体E-钙粘素基因的5′末端非翻译区序列。
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