人乙醇脱氢酶ADH1B2在毕赤酵母中的表达及活性分析

来源 :浙江大学学报(理学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户：hxr906646527

【摘要】

：

根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤

【作者】

：

汤甜甜周亮吉鹏飞鲍文娜龚兴国

【机构】

：

浙江大学生命科学学院

【出处】

：

浙江大学学报(理学版)

【发表日期】

：

2012年5期

【关键词】

：

乙醇脱氢酶毕赤酵母酶活性活性氧化物(ROS) 谷胱甘肽(GSH) Akt

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根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5％(υ/v)甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE- Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8000 U·mg-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADHIB2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平

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