为研究4′-氯地西泮和二氯西泮在人体内的代谢产物,本研究通过体外温孵体系肝微粒体代谢模型进行实验,在Wistar大鼠雌雄混合肝微粒体中分别加入4′-氯地西泮和二氯西泮对照品各1μg,模拟人体内的代谢过程孵育4 h后,采用Agilent Eclipse plus C18色谱柱(100 mm×2.1 mm×5μm)进行分离,以20 mmol/L乙酸铵-0.1％ 甲酸-5％ 乙腈(A)和乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,液相色谱-Q-Exactive组合型四极杆Orbitrap质谱(LC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)对肝微粒体温孵体系中的Ⅰ相、Ⅱ相代谢产物及其代谢途径进行分析.结果表明,4′-氯地西泮经过代谢共产生5种Ⅰ相代谢产物和2种葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代谢产物,二氯西泮经过代谢共产生6种Ⅰ相代谢产物和1种葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代谢产物,包含的主要代谢途径为脱烷基化、羟基化以及与葡萄糖醛酸结合,代谢产物的不同可能来源于氯原子的取代位置.本研究阐述了4′-氯地西泮和二氯西泮在大鼠肝微粒体体外温孵体系中的代谢产物、代谢途径以及代谢特点,可为临床医学及法医学实验室相关案件的检测提供参考.