目的构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,建立稳定转染的HEK293细胞系并检测其表达情况。方法以Genbank中人GDF5序列为模板,通过PCR扩增GDF5序列,插入pEGFP-N1空载体,构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,进行双酶切图谱分析和DNA测序鉴定。将pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞,然后通过荧光显微镜、Real-time PCR和Western blot技术检测GDF5的表达情况。结果双酶切鉴定结果显示,重组质粒pEGFP-N1-GDF5经NHEL和HindⅢ双酶切后得到同样的2个条带,目的条带的长度与GDF5cDNA长度相符。重组质粒pEGFPN1-GDF5插入片段的DNA序列与GDF5基因序列一致。pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞后48 h荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光。Real-time PCR检测与Western blot检测GDF5基因在HEK293细胞中的mRNA与蛋白水平存在较高表达。结论 pEGFP-N1-GDF5真核表达载体构建成功,为进一步研究GDF5基因功能奠定了基础。