【摘 要】
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microRNA-124(miR-124)丰富表达于脑组织中,调控神经细胞分化,同时在肿瘤组织中,miR-124还参与调控肿瘤细胞的增殖。分析表明,猪miR-124的前体序列位于4号和14号染色体中。本
【机 构】
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华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展863计划(No.2013AA102502);国家自然科学基金项目(No.31072009)资助
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microRNA-124(miR-124)丰富表达于脑组织中,调控神经细胞分化,同时在肿瘤组织中,miR-124还参与调控肿瘤细胞的增殖。分析表明,猪miR-124的前体序列位于4号和14号染色体中。本研究从长白猪(Sus scrofa)DNA基因组中扩增miR-124的前体序列,连接到T载体中,再经过EcoRⅠ和NotⅠ双酶切T载体,回收相应的酶切片段,将酶切片段连接到PiggyBac(PB)转座子载体中,然后将重组载体(PBmiR-124a1,PB-miR-124a2)转染猪肾细胞系PK15细胞,通过绿色荧光蛋白的表达检测转染效率,用嘌呤霉素进行稳转细胞的筛选,最后通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定细胞内miR-124的表达活性。结果显示,成功构建了重组转座子载体PB-miR-124a1和PB-miR-124a2,观察绿色荧光蛋白的表达,显示转染效率较高;稳定筛选的最佳嘌呤霉素的浓度为2μg/mL。qRT-PCR结果显示,和对照组相比,稳定转染PB-miR-124a2组miR-124的表达显著升高(P<0.01),而转染PB-miR-124a1组miR-124的表达升高不显著(P=0.06),说明miR-124的本底表达主要来源于ssc-mir-124a2基因。本实验为研究猪miR-124功能机制提供了基础材料。
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